Estudio del perfil Th17 en pacientes pediátricos con candidiasis mucocutánea crónica de la provincia de Mendoza

Abstract

Las células Th17, producen IL-17A, que desempeña un rol relevante en la inmunidad antifúngica. Los linfocitos Th1 producen principalmente IFNγ, responsable de la inmunidad mediada por células. Polimorfismos genéticos asociados a defectos en la diferenciación y proliferación hacia Th17 aumentan la susceptibilidad a la candidiasis mucocutánea crónica (CMC). Objetivo: Contribuir al diagnóstico de CMC en pacientes pediátricos mediante evaluación del perfil linfocitario Th17. Diseño y población: Estudio observacional, transversal, analítico, prospectivo en individuos de 0 a 17 años con CMC. Se incluyeron 22 individuos controles de igual rango etario. Método: Se aislaron células mononucleares de sangre de ambos grupos en estudio, se realizaron cultivos primarios estimulados in vitro con PMA/ionomicina. Se evaluó la frecuencia de linfocitos T CD4+ productores de IL-17A y linfocitos T CD4+ productores de INFγ utilizando anticuerpos monoclonales y Citometría de Flujo. Además, se empleó la técnica de ELISA para la determinación de la concentración de IL-17A en sobrenadante de cultivo y suero. Resultados: Se observó disminución en la frecuencia de linfocitos Th17 con aumento de los linfocitos Th1 en pacientes con CMC. Esta disminución no guardó relación con el diagnóstico referido, recurrencia de los síntomas, ni con la presentación clínica de la CMC. El análisis de la relación Th1/Th17 mostró desequilibrio, con un claro aumento (3,57 veces) en pacientes con CMC. No se observó correlación entre la frecuencia de células Th17 con la concentración de IL-17A. Conclusiones: La Citometría de Flujo proporciona un método eficiente para identificar deficiencias en las células productoras de IL-17, aportando valiosa información sobre el fenotipo inmune del paciente, la severidad de su disfunción, la progresión de la enfermedad; y como herramienta diagnóstica y facilitadora hacia la identificación del defecto molecular y el correcto tratamiento en pacientes con CMC.

Abstract Introduction: Th17 cells produce IL-17A which is relevant for antifungal immunity. On the other hand, Th1 cells mainly produce IFNγ, which is responsible for cell-mediated immunity. Genetic polymorphisms associated with defects in differentiation and proliferation of Th17 cells increase susceptibility to chronic mucocutaneous candidiasis (CMC). Objective: Contribute to CMC diagnosis in the pediatric population by evaluating the Th17 profile. Design and population: An observational, cross-sectional, analytical, prospective study in individuals from 0 to 17 years of age with CMC was performed. Twenty-two control patients of the same age range were included. Method: Blood mononuclear cells were isolated from both study groups, primary cultures generated with PMA/ionomycin as stimulant. The frequency of IL-17A and INFγ-producing CD4+ T lymphocytes was evaluated using monoclonal antibodies and Flow Cytometry (FC). In addition, the ELISA technique was used to determine the concentration of cytokines in culture supernatant and serum. Results: A decrease in the frequency of Th17 cells with an increase in Th1 cells was observed in patients with CMC. This decrease was not related to the referred diagnosis, recurrence of symptoms, or the clinical presentation of CMC. Analysis of the Th1/Th17 ratio showed an imbalance, with a clear increase (3.57-fold) in patients with CMC. No correlation was observed between the frequency of Th17 cells and the concentration of IL-17. Conclusions: Flow Cytometry provides an efficient method to identify deficiencies in Th17 cells, providing valuable information on the patient's immune phenotype, the severity of its dysfunction, the progression of the disease; as a diagnosis and facilitator to identify the molecular defect and the correct treatment in CMC´s patients.