Estandarización de un diseño de microarreglos de tejido para la detección inmunohistoquímica de proteínas fusión del gen NTRK en una serie de tumores sólidos

Abstract

Los genes NTRK participan en la expresión de receptores tirosina kinasa, los cuales participan en la diferenciación, desarrollo y regulación del sistema nervioso. Las fusiones en estos genes constituyen el principal mecanismo de activación oncogénica y se encuentran en frecuencias variables en diversos tumores tanto en población pediátrica como en adultos. Su detección es relevante ya que actualmente existe terapia dirigida con inhibidores selectivos de receptores TRK con respuesta favorable. Existen múltiples formas de identificar estas fusiones, cada una con ventajas y limitaciones, entre ellas la inmunohistoquímica como herramienta de tamizaje. Este trabajo tiene como propósito la realización y estandarización de una técnica de inmunohistoquímica a través de microarreglos de tejido, con el fin de detectar proteínas que pudieran indicar posibles fusiones de los genes NTRK. Se evaluó el marcador VENTANA pan-TRK (EPR17341) en 93 casos que incluyen gliomas, carcinomas tiroideos, adenocarcinomas de colon y pulmón, carcinoma escamocelular, melanomas y carcinoma secretor de mama, distribuidos en 14 microarreglos. El control positivo sugerido, apéndice cecal, se expresó en todos los microarreglos sumado al control interno del tejido nervioso en los tumores gliales. Su interpretación fue sencilla, exceptuando en los tumores de sistema nervioso, sin presentar discordancias. La expresión fue la esperada según lo reportado en la literatura mundial. La inmunohistoquímica realizada en microarreglos de tejido constituye una técnica útil y costo efectiva que permite evaluar múltiples muestras simultáneamente, racionalizando los recursos y permitiendo la selección de aquellos pacientes que requieren una prueba molecular confirmatoria para que obtengan un tratamiento adecuado. (Texto tomado de la fuente).

NTRK genes code for three transmembrane tyrosine-kinase receptors, which are involved in nervous system differentiation, development and regulation. NTRK fusions constitute the main mechanism of oncogenic activation and are found in variable frequencies in both pediatric and adult cancer types. Detection of NTRK fusions is relevant given the existence of targeted therapy with TRK inhibitors with positive outcomes. There are different testing methods used to identify these molecular alterations, including immunohistochemistry approach as a screening tool followed by molecular testing to confirm fusion partners.This project has the intended outcome of standarization of an immunohistochemical assay through the construction of manual tissue microarrays in order to detect proteins that could indicate possible NTRK fusions. VENTANA pan-TRK (EPR17341) assay was evaluated in 93 cases including gliomas, thyroid carcinomas, colon and lung adenocarcinomas, squamous cell carcinoma, melanomas and secretory breast carcinoma. These cases were distributed in 14 microarrays. The suggested control in appendix, was positive in all tissue microarrays along with the normal nervous tissue used as internal control in glial tumors. The interpretation was simple, except in tumors of the nervous system. There were not significant discrepancies following the established positive criteria. The expression was the expected as what global sources reported. Immunohistochemistry performed on tissue microarrays is a useful and cost-effective technique that allows multiple samples to be evaluated simultaneously, it´s a good way for optimize resources and allowing the selection of those patients who will require a confirmatory molecular test in order to obtain the most accurate treatment.