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Caracterización de la miosina de clase V del hongo filamentoso Neurospora crassa
Characterization of class V myosin in filamentous fungus Neurospora crassa
Autor
Arianne Ramírez del Villar
Institución
Resumen
Los hongos filamentosos crecen en forma polarizada a través de la secreción de vesículas que contienen componentes de la pared celular y que viajan hacia el ápice de la célula. El movimiento de estos componentes es producido por proteínas motoras asociadas al citoesqueleto y en el caso de los filamentos de actina, estos motores se conocen como miosinas. Se ha reportado que la miosina de clase V es responsable del transporte de cargas intracelulares. Tiene un dominio diluido situado en el extremo carboxilo que une a la miosina a diferentes cargas. En hongos filamentosos, pocos estudios se han realizado acerca de la miosina de clase V. En este trabajo, se estudió la dinámica y localización de la miosina de clase V, así como la mutante carente del gen de la miosina de clase V en el hongo filamentoso Neurospora crassa. Se encontró que la miosina de clase V se localiza en el citoplasma en conidios, y una vez que germinan, esta se localiza en el ápice formando un domo apical donde permanece en las hifas maduras. Además, forman parte del septo. La ausencia de la miosina de clase V produce alteraciones en el crecimiento y la morfología de las hifas. Las colonias de la miosina de clase V mutante son más pequeñas y más compactas que las de la cepa WT (86,92% más pequeñas). Las colonias mutantes tenían un descenso de 90,51% en la tasa de crecimiento en comparación con la WT y sólo produjeron 22,80% de la biomasa de la WT. Las observaciones con microscopía confocal muestran diferencias en la distribución de los componentes de la pared celular de los conidios, germínulas e hifas maduras entre las dos cepas. Por otra parte, en las hifas mutantes, el Spitzenkörper está claramente desorganizado, observándose como una mancha difusa en el ápice. Las vacuolas se localizan en la punta y no las zonas más alejadas a esta como en la WT. Además, hubo una reducción en la producción de conidios de la mutante (0,09%) pero un aumento en su área (2.5 veces mayor) y en la cantidad de núcleos por conidio, así como anomalías en la morfología de los conidióforos. La mutante de la miosina de clase V ramifica principalmente en la punta de la hifa y las hifas tenían un diámetro más pequeño (33,33% menor) que en el WT. Toda esta información sugiere que la miosina de clase V en N. crassa aunque no es esencial, juega un papel importante en la morfogénesis y el crecimiento del hongo Filamentous fungi grow as polarized through secretion vesicles containing cell wall components and traveling towards the apex of the cell. The movement of these components is caused by motor proteins associated with cytoskeleton. The motor proteins associated with actin cytoskeleton are known as myosins. It has been reported that myosin class V is responsible for intracellular transport of cargo. It has a dilute domain located at the carboxyl terminus that binds myosin at different cargoes. In filamentous fungi, few studies have been performed on the class V myosin. In this work, was studied the dynamics and localization of myosin V class, as well as the mutant lacking of this gene in the fungus filamentous Neurospora crassa. We found that the class V myosin is localized in the cytoplasm in conidia, and after germinate, is located at the apex like apical dome where it remains in mature hyphae. Furthermore, form part of the septum. The absence of myosin class V produces alterations in growth and morphology of the hyphae. Colonies of the myosin class V mutant are smaller and more compact than the WT strain (86.92% less). The mutant colonies had a 90.51% decline in the growth rate compared to the WT and produced only 22.80% of the biomass of the WT. Observations in the confocal microscopy showed differences in the distribution of cell wall components of conidia, germling and mature hyphae in the mutant strain. Moreover, in the mutant hyphae, the Spitzenkörper clearly is disorganized observed as a diffuse spot at the apex. Vacuoles are located at the tip and not the furthest away of this region as WT. Furthermore, there was a decrease in the production of conidia of the mutant (0.09%) but an increase in area (2.5 times) and in the number of nuclei per conidium, as well as abnormalities in the morphology of the conidiophores. The mutant, branches mainly at the tip of the hyphae and the hyphae have a smaller diameter (33.33% less) than in the WT. This information suggests that myosin class V in N. crassa although not essential, plays an important role in morphogenesis and growth of fungus
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