| dc.contributor | Karymy Andrea Negrete Zapata | |
| dc.contributor | Vaccimed S. A. | |
| dc.date | 2017-10-31 | |
| dc.date | 2021-07-27T09:54:44Z | |
| dc.date.accessioned | 2022-12-21T22:25:04Z | |
| dc.date.available | 2022-12-21T22:25:04Z | |
| dc.identifier | 17VIP-88146 | |
| dc.identifier | 2017-88146-INNOVA_PRODUCCION | |
| dc.identifier | http://repositoriodigital.corfo.cl:80/xmlui/handle/11373/338416 | |
| dc.identifier.uri | https://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/5519250 | |
| dc.description | Evaluación de la Plataforma de Producción de Péptidos Recombinantes Desarrollada por Cebib para la Síntesis de las Variantes 1a y 1b del Antígeno Gnrx G/q a Escala de Laboratorio con el Fin de Aumentar Rendimiento y Mantener Parámetros de Calidad (pureza y Bioactividad) del Proceso Productivo Actual de Vacunas de Inmunocastración de la Empresa Vaccimed. | |
| dc.description | El Servicio que Entregará Cebib a Vaccimed Corresponde a la Implementación de su Plataforma de Producción de Péptidos para la Obtención de las Variantes 1a y 1b del Antígeno Gnrx G/q. Este Servicio Incluye la Generación de Cepas Bacterianas Productoras de los Antígenos y la Producción a Escala de Laboratorio de los Antígenos de Interés de la Empresa. El Trabajo en el Laboratorio Considera la Caracterización de la Producción la Evaluación de Diferentes Estrategias de Purificación de los Antígenos y la Caracterización de los Antígenos de Interés Producidos en Términos de Pureza y Bioactividad. Con Esta Información se Podrán Identificar Aquellas Variables que Sean Relevantes de Considerar en las Etapas Posteriores al Presente Proyecto que Incluirían el Escalamiento del Proceso y su Optimización. Los Resultados de Estas Actividades Serán Puestos a Disposición de la Empresa por Medio de un Informe Final. Plan de Actividades1. - Generación de Cepas Bacterianas Productoras de los Antígenos: Considera Realizar las Construcciones Genéticas que Permitirán la Expresión de los Antígenos de Interés en E. Coli y la Posterior Generación de las Cepas Modificadas. En Esta Primera Actividad el Vector de Expresión Utilizado por la Nueva Plataforma Denominado Pssd Debe Ser Acondicionado para Cumplir con la Normativa Vigente para la Producción del Producto de la Empresa Vaccimed. Para esto mediante Técnicas de Biología Molecular Tradicionales se Reemplazará su Marcador de Selección por Aquel que Utiliza el Sistema de Producción Actual de la Empresa. A Continuación se Clonará en el Vector de Expresión las Secuencias Codificantes para las Variantes 1a y 1b del Antígeno Gnrx G/q. El Adn Templado Será Provisto por la Empresa Vaccimed. Estas Secuencias Luego Serán Clonadas en el Sitio de Clonamiento del Vector de Expresión. Todos los Constructos Generados Serán Verificados mediante Pcr Análisis de Restricción y Secuenciación. Luego los Constructos Obtenidos Serán Introducidos en Células E. Coli Bl21 (de3) las que Expresarán las Secuencias Codificantes para los Antígenos de Interés. 2. - Caracterización de la Expresión de los Antígenos y Evaluación de Distintos Métodos para Purificación de Cada Antígeno Peptídico Producido: Corresponde a la Actividad en la cual se Evaluará la Producción de los Dos Antígenos Peptídicos de Interés Según Dos Temperaturas de Inducción Diferentes. De Acuerdo a Estos Resultados se Evaluarán Según Corresponda las Distintas Alternativas de Purificación que Ofrece la Plataforma Desarrollada por Cebib. En Esta Segunda Actividad las Células Transformadas Serán Cultivadas bajo Distintas Condiciones de Crecimiento y se Evaluará su Capacidad para Producir los Antígenos de Interés. Para Cada Antígeno se Evaluará el Efecto de la Temperatura de Inducción. Es Decir se Caracterizará la Expresión del Antígeno Recombinante Respecto a su Rendimiento y a su Ubicación en las Distintas Fracciones Celulares a Temperatura de Inducción 25ºc y 37ºc. Lo Anterior Implica la Evaluación de 2 Condiciones de Cultivo para Cada una de las Variantes Antigénicas. Todos los Experimentos se Realizarán en Triplicado para Evaluar Reproducibilidad y Robustez de los Resultados. La Evaluación de la Expresión Recombinante de los Antígenos Peptídicos Comprende la Lisis Celular mediante Sonicación y la Posterior Separación de las Fracciones Celulares mediante Centrifugación. El Análisis de las Distintas Fracciones Celulares se Realizará por Sds-page y la Cuantificación de Proteínas Según el Método de Bradford. A Partir de los Resultados de la Expresión de las Variantes Antigénicas 1a y 1b se Seleccionará al Menos una Condición de Expresión para Cada Variante de Acuerdo al Rendimiento y Reproducibilidad entre los Lotes Obtenidos. Para ellas se Evaluará Según Corresponda las Distintas Estrategias de Purificación que Ofrece la Plataforma Cebib las Cuales Involucran Métodos No Cromatográficos como Precipitación Selectiva por Temperatura y Recuperación Directa desde Fracción Celular o Bien Métodos Cromatográficos Tradicionales. El Criterio de Evaluación Será el Rendimiento del Proceso y su Reproducibilidad. 3. - Caracterización del Producto Final: Corresponde a la Determinación de Pureza y Bioactividad de los Antígenos Producidos bajo las Diferentes Condiciones de Purificación. Con Esta Información se Podrá Determinar Si es que el Producto Obtenido Mantiene Calidad es Decir es Seguro y Eficaz. Esta Actividad Incluye Determinar Pureza mediante Electroforesis en Gel de Poliacrilamida (sds-page) y Bioactividad por Medio de Ensayos In Vivo en Ratones a los Cuales se Les Medirá su Respuesta Inmune tras la Inyección del Antígeno Obtenido Utilizando la Plataforma Cebib para la Producción de Péptidos Recombinantes. Se Privilegiarán Aquellas Muestras Cuya Metodología de Purificación Permita la Mayor Recuperación de Antígeno y que al Mismo Tiempo Alcance los Requisitos de Pureza Necesarios para Cumplir con la Regulación Exigida para Vacunas Recombinantes (&,gt,70%). 4. - Evaluación del Potencial de Escalamiento del Proceso: de Acuerdo a los Resultados Previos se Definirá Aquella Alternativa de Proceso de Producción y Purificación que Entregue Mejores Condiciones de Rendimiento Pureza y Bioactividad y a la Vez Tenga Buen Potencial de Escalamiento Identificando Aquellas Variables Críticas. Para Dicho Proceso se Modificarán las Condiciones de Crecimiento Celular Reemplazando el Medio de Cultivo por Aquel que Actualmente Utiliza la Empresa Vaccimed que Permite Obtener Mayor Densidad Celular. Con esto se Evaluará la Robustez de la Plataforma Determinando Si en Estas Condiciones se Obtiene un Mayor Rendimiento Asociado al Mayor Número de Células y Si se Mantiene la Pureza del Producto Final Obtenido. Resultados Esperados1. - un Proceso de Producción a Escala de Laboratorio para Cada una de las Variantes del Antígeno de Interés: esto Incluye la Evaluación del Desempeño de la Plataforma para la Producción de las Dos Variantes de los Antígenos Peptídicos de Interés de Vaccimed (1a y 1b) a Escala de Laboratorio desde la Adaptación del Vector de Expresión Pssd hasta la Purificación de Cada Antígeno. Cabe Mencionar que este Resultado Incluye la Selección de las Mejores Alternativas de Proceso para Cada Antígeno en Términos de Rendimiento Final de Cada Variante Antigénica con Respecto a los Distintos Métodos de Producción y Purificación Evaluados. Se Espera Conseguir un Producto con Mayor de Rendimiento que el Sistema Actual de Producción (alrededor de 20 Mg de Antígeno por Litro de Cultivo al Final de la Etapa de Purificación). Adicionalmente se Identificarán Variables Críticas a Considerar para Futuro Trabajo de Escalamiento del Proceso Productivo. 2. - Datos sobre la Reproducibilidad de los Procesos Productivos y la Calidad de los Antígenos Producidos: Habiendo Realizado las Pruebas de Expresión Recombinante del Péptido en Triplicado bajo 2 Condiciones Diferentes de Temperatura de Inducción para Cada V | |
| dc.description | Corporación de Fomento de la Producción | |
| dc.title | Mejoramiento del Proceso de Producción del Antígeno de una Vacuna de Inmunocastración de Mamíferos: Validación a Nivel de Laboratorio del Uso de Nueva Plataforma de Alta Eficiencia para Producir 2 Variantes de un Antígeno Peptídico Recombinante. | |
| dc.type | proyecto | |
