| dc.contributor | Karymy Andrea Negrete Zapata | |
| dc.contributor | Sociedad Comercial Saavedra & Berndt Compañia Limitada | |
| dc.date | 2017-10-31 | |
| dc.date | 2021-07-12T09:01:48Z | |
| dc.date.accessioned | 2022-12-21T13:22:36Z | |
| dc.date.available | 2022-12-21T13:22:36Z | |
| dc.identifier | 17VIP-88068 | |
| dc.identifier | 2017-88068-INNOVA_PRODUCCION | |
| dc.identifier | http://repositoriodigital.corfo.cl:80/xmlui/handle/11373/124788 | |
| dc.identifier.uri | https://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/5439977 | |
| dc.description | Aislar y Formular un Microencapsulado a Partir de Levaduras Patagónicas para su Uso en la Industria Cervecera. | |
| dc.description | 1. - Aislamiento de Levaduras Nativas desde Frutos Nativos de la Región de Aysén el Muestreo Contempla la Obtención de Muestras de Hojas de Árboles Nativos como Coigüe Arrayán Lenga Luma y en Frutos como Calafate Maqui Rosa Mosqueta y Cauchao de la Región Aysén. En las 10 Comunas de la Región se Produce en Forma Natural el Calafate y Cauchao. El Maquí y la Rosa Mosqueta en Sectores de Mediana Pluviosidad (zonas como la Junta Mañihuales Coyhaique Valle Simpson Lago Verde Cochrane Chile Chico. Se Colectarán Hojas y Frutos Sanas Utilizando Pinzas Desinfectadascon Alcohol 70% V/v y Colectadas en Bolsas de Polietileno Estériles. En el Laboratorio se Desinfectará la Cara Abaxial de las Hojas mediante un Hisopo con Alcohol 70% V/v (estudios Previos Permitieron la Puesta a Punto de este Trabajo de Desinfección el cual No Afectará las Levaduras). Se Utilizarán Diferentes Métodos de Aislamiento de Levaduras Propuestos por Muñoz Et Al. ( 2013) y se Determinará la Cantidad de Unidades Formadoras de Colonias por Unidad de Área de Superficie Foliar (ufc/cm2) (rose 1975). El Medio de Cultivo que se Utilizará para Aislar Levaduras Corresponde al Extracto Acuoso en Medio Myp Agar (extracto de Malta 7 G L-1, Extracto de Levadura 05 G L-1, Peptona de Soya 25 G L-1 y Agar 15 G L-1). Además se Agregarán una Mezcla de Antibióticos (penicilina y Estreptomicina 1:1) para Solo Favorecer el Crecimiento de Levaduras (díaz-navarrete Et Al. 2016). Las Placas Petri Incluyendo el Medio Myp Agar Será Incubado a 23ºc durante 7 Días. Métodos de Aislamiento de Levaduras. Aislamiento por Agitación Vertical: las Hojas Serán Colocadas en Tubos de Ensayo Conteniendo Volúmenes de 2 3 5 y 10 Ml de Agua Destilada Estéril. Los Distintos Tubos se Agitarán durante 10 Min en Agitador Vertical Vortex. El Ensayo se Realizará Portriplicado. Aislamiento por Agitación Vertical con Surfactante (tween 80): se Prepararán 3 Tubos de Ensayo Conteniendo 4 Hojas en 2 Ml de una Solución de Tween 80 al 005% V/v. Los Tubos se Agitarán durante 10 Min y se Sembrarán 3 Placas Petri con Medio Myp Agar. Aislamiento por Sonicación: 6 Tubos Cada Uno de los Cuales Conteniendo 3 Hojas Sumergidas en 3ml de Agua Destilada Estéril Serán Agitados Verticalmente durante 10 Min tras lo cual se Procederá a la Siembra en Placa (myp Agar) de 100 Μl para Recuento de Unidades Formadoras de Colonias (ufc). Luego los Tubos Serán Sonicados de a Pares en un Baño Ultrasónico durante 2 y 10 Min. Cada Par de Tubos Recibirá una Potencia Distinta de Sonicación para el Primer Par Fue de 96 Watts (w) para el Segundo de 128w y para el Tercero de 160w. La Frecuencia de Sonicación se Mantendrá Constante en 45 Khz. A los 2 y 12 Minutos de Sonicación se Sembrarán Alícuotas del Extracto en Myp Agar de Todos los Tubos para Recuento de Ufc (muñoz Et Al. 2013). 2. - Identificar y Caracterizar Levaduras Aisladas mediante Técnicas Moleculares. Identificar Cepas de Levaduras. Las Placas de Cultivo con Myp Agar Serán Incubadas a 23ºc en Oscuridad durante 3 a 7 Días. Se Registrará el Número de Ufc por Placa mediante Observación con Lupa Olympus. Las Colonias Obtenidas Serán Clasificadas por su Morfología, Color Textura Brillo Tipo de Borde Viscosidad y Tamaño en Grupos Denominados Morfotipos (lebaron Et Al. 1998). Extracción del Dna y Amplificación de la Región Its Rdna. Las Levaduras se Cultivarán en Yeast Peptone Dextrose (ypd) durante 30 H a 25 °c el Dna de las Cepas Será Extraído con el Kit Yeast Dna Ezna. La Región 58s-its del Adn Ribosomal Nuclear (adnr) se Amplificará con los Partidores Its1 Its4 y Nl4. La Reacción Pcr se Llevará a Cabo en 25 Μl Compuesta por Gotaq® Green Master Mix (taq Dna Polymerase Dntps Mgcl2) (promega) y 05 Μl de los Primer Forward y Reverse. 4 Μl del Producto Pcr se Analizarán al 15% de Agarosa en Tae 1x y Visualizados en el Transluminador Foto/uv21. Se Utilizará el Marcador de Peso Molecular de 100pb Dna (thermo Scientific). La Concentración del Dna Será Medida en un Nanodrop Infinite M200 (díaz-navarrete Et Al. 2016). El Dna Amplificado Será Purificado y Enviado para Secuenciación a Unidad Omics (genómica-proteómica-bioinformática) de la Facultad de Ciencias de la Universidad Austral de Chile Ubicado en la Ciudad de Valdivia. Técnica Pcr-rflppara la Técnica Pcr-rflp los Productos Pcr de Laregión 5. 8s-its Serán Digeridos sin Purificación Adicional (5µl) con las Enzimas de Restricción Cfoi Haeiii (promega) Hinfi (new England Biolabs). La Incubación Será a 37 °c por 25 H. Los Fragmentos Serán Separados al 35% en Gel de Agarosa en Tae 1x por 2 H a 80v. El Tamaño de Bandas Será Estimado con el Marcador de 100-pb Dna (thermo Scientific). Para la Identificación de las Secuencias Obtenidas se Usará la Base de Datos Genbank con la Herramienta (blast). Para el Rflp en Silico los Patrones de Restricción Serán Predichos por el Programa Restrictionmapper. El Árbol Filogenético se Realizará con Mega5. 1 y el Modelo Kimura 2-parametros (k-2-p) para la Estimación de las Distancias el Booststrap Será de 1000 Réplicas (díaz-navarrete Et Al. 2016). 3. - Obtención de una Formulación Microencapsulada a Partir de Mejores Resultados en Pruebas de Fermentación. Para la Formulación de las Levaduras Patagonicas se Añadirá Maltodextrina (20%) y Posteriormente Serán Secados por Pulverización en un Secador por Aspersión Marca Buchi (mini Spray-dryer B290). Este Proceso Presenta una Serie de Ventajas como Son la Posibilidad de Establecer Esta Tecnología como un Proceso Contínuo su Facilidad de Manejo y su bajo Coste Características que Hacen de Esta Técnica Idónea para su Aplicación en Procesos Industriales. Las Temperaturas de Entrada/salida que se Utilizarán Serán las Siguientes: 120ºc/83ºc 140ºc/94ºc 160ºc/103ºc. La Tasa de Flujo de Aire de Secado la Presión de Aire del Compresor y la Velocidad de Alimentación Serán Constantes. Después de que el Proceso de Pulverización Haya Finalizado el Polvo se Recogerá en un Recipiente de Vidrio Envuelto con Papel de Aluminio y se Almacenará Inmediatamente en un Desecador que Contenga Gel de Sílice para Evitar la Humedad del Ambiente. Los Procesos de Secado por Aspersión Serán Todos ellos Llevados a Cabo por Triplicado. Estudio de las Propiedades del Polvo. Las Propiedades del Material Deshidratado Tales como el Tamaño de las Partículas la Homogeneidad del Polvo Obtenido la Eficiencia de Encapsulación y la Liberación del Principio Activo Serán Analizados Según la Metodología Propuesta por Pascual-villalobos y López 2013 . Entregables:resultados 1: Levaduras Aisladas desde Frutos Nativos. Resultados 2: Levaduras Aisladas Identiicadas por Técnicas Moleculares. Resultados 3: Ficha Técnica de la Formulación Obtenida a Partir de las Levaduras Aisaldas y Microencapsuladas. | |
| dc.description | Corporación de Fomento de la Producción | |
| dc.title | Obtención de una Formulación Microencapsulada de Levaduras Patagónicas para la Industria Cervecera. - | |
| dc.type | proyecto | |
