Avaliação da eficácia terapêutica e segurança toxicológica do sistema lipídico nanoestruturado contendo 2-hidroxichalcona por métodos alternativos para o tratamento da candidíase vulvovaginal

Abstract

As chalconas são uma classe de princípios ativos naturais precursores da biossíntese dos flavonoides. Dentro desta classe de compostos, existe uma subclasse de derivados das chalconas denominadas hidroxichalconas e que apresentam diversas atividades farmacológicas, como por exemplo, atividade antimicrobiana. Sabe-se que a candidíase vulvovaginal (CVV) ainda é uma das doenças que apresenta alta incidência e representa um grande problema de saúde pública. Considerando que os tratamentos com antifúngicos disponíveis apresentam efeitos colaterais e que se nota o aumento da resistência fúngica a estes fármacos, faz-se necessária a pesquisa de novas moléculas antifúngicas. O aumento de casos de CVV causadas por espécies não-albicans (naturalmente mais resistentes aos fármacos) reforçam esta necessidade de novas abordagens terapêuticas. A utilização das hidroxichalconas para o tratamento da CVV causada pela Candida albicans e espécies não-albicans ainda é pouco explorado. Outra abordagem terapêutica muito interessante e vantajosa são as terapias combinadas que muitas vezes são capazes de ampliar o espectro de ação, reduzir doses e efeitos colaterais de fármacos já existentes e evitar o surgimento de cepas resistentes. Dessa forma, este trabalho teve como objetivo propor uma nova abordagem terapêutica para o tratamento da CVV por meio da bioprospecção das atividades antifúngicas e toxicidade da 2-hidroxichalcona, 3’-hidroxichalcona, de suas associações com fármacos antifúngicos e associadas entre si, para incorporação em um carreador lipídico para aplicação intravaginal. Os resultados obtidos demonstraram atividade antifúngica da 2-hidroxichalcona e 3’-hidroxichalcona na faixa de 7,81 a 31,25 μg/mL, no entanto, estas moléculas apresentaram-se citotóxicas para a linhagem celular C33A em concentrações maiores que 9,3 μg/mL. Com o objetivo de reduzir a citotoxicidade e ampliar o espectro de ação, foi realizada a associação destas moléculas com fluconazol, clotrimazol e associadas entre si. Nos ensaios de atividade antifúngica combinatória foram observadas interações vantajosas como sinérgica e parcialmente sinérgica. Algumas destas interações não apresentaram citotoxicidade e com isso, foi possível encontrar combinações efetivas e não citotóxicas para incorporar em uma formulação. No desenvolvimento desta formulação, foram obtidos dois sistemas lipídicos (SL) para veiculação dos princípios ativos e que foram utilizados nos ensaios in vivo. Na avaliação da segurança toxicológica e eficácia terapêutica em G. mellonella, todas concentrações testadas e os dois SLs selecionados apresentaram ausência de toxicidade, exceto a maior concentração da combinação da 2-HC com fluconazol. Quanto a eficácia terapêutica, as duas concentrações testadas mostraram-se eficazes. Os SLs desenvolvidos apresentaram características mecânicas satisfatórias para aplicação intravaginal. O método analítico para quantificação da hidroxichalcona nos SLs foi considerado validado e os dois SLs selecionados foram capazes de incorporar altas porcentagens da 2-hidroxichalcona. De modo geral, os resultados obtidos foram satisfatórios e podem ser utilizados para propor uma nova possiblidade terapêutica para CVV.

Chalcones are a class of natural active ingredients that are precursors for the biosynthesis of flavonoids. Within this class of compounds, there is a subclass of derivatives of chalcones called hydroxychalcones, which have several pharmacological activities, such as antimicrobial activity. It is known that vulvovaginal candidiasis (VVC) is still one of the diseases with a high incidence and represents a major public health problem. Considering that the available antifungal treatments have side effects and that there is an increase in fungal resistance to these drugs, it is necessary to research new antifungal molecules. The increase in VVC cases caused by non-albicans species (naturally more resistant to drugs) reinforces this need for new therapeutic approaches. The use of hydroxychalcones for the treatment of VVC caused by Candida albicans and non-albicans species is still poorly explored. Another very interesting and advantageous therapeutic approach is the combination therapies that are often able to broaden the spectrum of action, reduce doses and side effects of existing drugs and prevent the emergence of resistant strains. Thus, this study aimed to propose a new therapeutic approach for the treatment of VVC through the bioprospecting of the antifungal activities and toxicity of 2-hydroxychalcone, 3'-hydroxychalcone, its associations with antifungal drugs and associated with each other, for incorporation in a lipid carrier for intravaginal application. The results obtained showed antifungal activity of 2-hydroxychalcone and 3'-hydroxychalcone in the range of 7.81 to 31.25 μg/mL, however, these molecules were cytotoxic to the C33A cell line at concentrations greater than 9.3 μg/mL. In order to reduce cytotoxicity and broaden the spectrum of action, these molecules were combined with fluconazole, clotrimazole and associated with each other. In the combinatorial antifungal activity assays, advantageous interactions such as synergistic and partially synergistic were observed. Some of these interactions did not show cytotoxicity and, therefore, it was possible to find effective and non-cytotoxic combinations to incorporate in a formulation. In the development of this formulation, two lipid systems (SL) were obtained for the delivery of active principles, and which were used in in vivo assays. In the evaluation of toxicological safety and therapeutic efficacy in G. mellonella, all concentrations tested, and the two selected SLs showed no toxicity, except for the highest concentration of the combination of 2-HC with fluconazole. As for therapeutic efficacy, the two concentrations tested proved to be effective. The developed SLs showed satisfactory mechanical characteristics for intravaginal application. The analytical method for quantifying hydroxychalcone in SLs was considered validated and the two selected SLs were able to incorporate high percentages of 2-hydroxychalcone. In general, the results obtained were satisfactory and can be used to propose a new therapeutic possibility for VVC.