Carnívoros selvagens generalistas como sentinelas para filarioses e leishmaniose visceral no Parque Nacional do Iguaçu

Abstract

Carnívoros generalistas são pouco exigentes e apresentam hábitos alimentares variados e, devido a este comportamento oportunista, estes animais aproximam-se de populações humanas, tornando-se vulneráveis aos patógenos de animais domésticos, mas também podendo carrear patógenos para os animais domésticos e o homem. No Parque Nacional do Iguaçu (PARNA Iguaçu), os quatis e os graxains são espécies frequentes de carnívoros generalistas e oportunistas e com ampla distribuição no território do parque. Recentemente, foi diagnosticada por métodos parasitológicos tradicionais a presença de alguns gêneros de filarídeos com potencial zoonótico em carnívoros selvagens no interior do parque. Além disso, casos autóctones de leishmaniose visceral canina foram confirmados em cães domésticos e em humanos na região. Dessa forma, devido à importância para o cenário da saúde pública atual, esta pesquisa teve como objetivos o estudo das filarioses e leishmaniose visceral em carnívoros generalistas do PARNA Iguaçu, bem como entender a relação parasita-hospedeiro e os processos ecológicos que podem favorecer a transmissão desses agentes entre populações silvestres, domésticas e o homem. Para isso, foram capturados 284 mamíferos selvagens, por meio de armadilhas Tomahawk e Sherman. Os animais foram contidos quimicamente para punção da jugular e coleta de amostras sanguíneas, para diagnóstico parasitológico, sorológico e molecular de filarídeos e tripanossomatídeos. Foram visitadas 64 propriedades rurais do entorno do PARNA, onde foram coletadas amostras de 226 cães domésticos. Foram realizadas ainda necropsias de 20 carnívoros selvagens atropelados na BR 469 (dentro do PARNA), visando às mesmas análises. O diagnóstico inicial de filarídeos foi realizado pelo teste de Knott modificado, posteriormente, seguiu-se a extração de DNA das amostras sanguíneas e de tecidos, realizada pela técnica de clorofórmio-álcool isoamílico. Para triagem molecular de filarídeos, as reações de PCR foram realizadas com amplificação da região 5S rDNA, posteriormente as amostras positivas passaram por novas reações de PCR com os genes Miosina e hsp70 de filarídeos, visando identificação das espécies. Com relação à pesquisa molecular de Trypanosomatidae, primeiramente foi realizada a PCR com primers do gene mitocondrial Citocromo B, e as amostras positivas, passaram por nova PCR com primers da região 18S rDNA de tripanosomatídeos. Todas as amostras positivas na PCR foram submetidas a PCR de sequenciamento com kit BigDye, em sequenciador ABI3130. Os eletroferogramas foram analisados e as sequências alinhadas junto às sequências do banco do NCBI. A partir destas, foram geradas árvores filogenéticas para cada gene estudado de cada grupo de parasitas. Foi realizada a RIFI para Leishmania infantum de todos os cães domésticos amostrados. Como resultados foi possível observar a presença de cinco espécies de filarídeos parasitando quatis (Nasua nasua) no PARNA Iguaçu: Mansonella sp. 1, Mansonela sp. 2, dois gêneros novos aqui identificados como Embainhada 1 e 2, e Dirofilaria immitis. Em cães domésticos, foi identificada a presença de Acanthocheilonema sp. Estes dados são inéditos na região em estudo, uma vez que pouco se conhece a respeito de filarídeos de animais selvagens da região neotropical. É importante ressaltar que os quatis apresentaram alta prevalência de infecção de filarídeos (74,5%), podendo atuar como bons reservatórios destes nematódeos na região estudada. Alguns dos gêneros identificados são descritos como parasitas zoonóticos em outras regiões do Brasil e do mundo, o que alerta para a necessidade de vigilância em saúde, pois estes parasitas podem ter potencial zoonótico. Com relação aos tripanossomatídeos, apenas em cães domésticos foi detectada a presença de L. infantum em animais provenientes da cidade de Foz do Iguaçu, apesar de terem sido identificados cães positivos na RIFI para L. infantum (28,7%) em algumas propriedades do entorno do PARNA. Foi ainda identificada a presença de Trypanosoma cruzi em um quati da área turística das Cataratas do Iguaçu, sendo tipificado como T. cruzi DTU’s TcIV. É possível sugerir que os cães domésticos sejam os reservatórios de importância para a leishmaniose visceral em Foz do Iguaçu, PR, havendo necessidade de maior vigilância e ações no controle dos vetores e reservatórios domésticos, para evitar que o parasita adentre o PARNA e seja amplificado (spillback) nas inúmeras espécies de hospedeiros susceptíveis que habitam a mata atlântica do PARNA Iguaçu. A presença de T. cruzi em quatis é um alerta, pois estes animais atuam como bons sentinelas do ambiente selvagem, e, desta forma, demonstrando que T. cruzi está circulando na área florestal. Os dados obtidos nesta pesquisa indicam a ocorrência e circulação, no PARNA Iguaçu, de parasitas transmitidos por vetores que são de grande importância para a saúde pública em todo o mundo. Além disso, é possível sugerir que na região do PARNA Iguaçu os cães domésticos são responsáveis por manterem a circulação de L. infantum, enquanto os quatis são excelentes reservatórios de nematódeos filarídeos e podem atuar também como reservatórios de T. cruzi, conforme já relatado em outros biomas brasileiros, sendo um importante animal sentinela a ser monitorado por órgãos de vigilância em saúde na região estudada.

Generalist carnivores are undemanding and have varied eating habits, and, due to this opportunistic behavior, these animals are close to human populations, becoming vulnerable to domestic animal pathogens, but also being able to carry pathogens to domestic animals and man. In the Iguaçu National Park (PARNA Iguaçu), ring-tailed coatis and crab-eating foxes are common species of generalist and opportunistic carnivores with a wide distribution in the park's territory. Recently, by traditional parasitological methods, the presence of some filarids nematodes with zoonotic potential was diagnosed in wild carnivores from PARNA Iguaçu. Also, autochthonous cases of Canine Visceral Leishmaniasis have been confirmed in domestic dogs and humans in the region. Thus, due to the importance for the current public health, this research aims to study filariasis and visceral leishmaniasis in generalist carnivores from PARNA Iguaçu, as well as to understand the parasite-host relationship and the ecological processes that may favor transmission of these agents among wild populations, domestic dog and humans. For this, 284 wild mammals were captured using Tomahawk and Sherman traps. The animals were chemically contained for jugular puncture and collection of blood samples for parasitological, serological, and molecular diagnosis of filarids and trypanosomatids. Sixty-four rural properties were visited around PARNA, and 226 samples were collected from domestic dogs. Necropsy of 20 wild carnivores run over in the BR 469 road (inside PARNA) was performed, aiming at the same analyzes. The modified Knott test performed the initial filariid diagnosis, subsequently followed by the DNA extraction from blood and tissue samples, through by the chloroform-isoamyl alcohol technique. For molecular screening of filarids, the PCR reactions were performed with 5S rDNA region amplification, afterward new PCR reactions were performed with the filariid positive samples, with amplification of Myosin and hsp70 genes, aiming at species identification. Regarding the molecular research of Trypanosomatidae, PCR was first performed with primers from the mitochondrial Cytochrome B gene. New PCR was performed with the positive samples with amplification of the 18S rDNA region of trypanosomatids. All PCR positive samples were subjected to sequencing PCR with the BigDye kit, in an ABI3130 sequencer. The electropherograms were analyzed, and the sequences aligned with the NCBI bank sequences. From these, phylogenetic trees were generated for each gene studied in each group of parasites. Leishmania infantum IIFT was performed for all dogs sampled. As a result, it was possible to observe the presence of five species of filaridae parasitizing ring-tailed coatis (Nasua nasua) in PARNA Iguaçu: Mansonella sp1, Mansonela sp. 2, two new genera identified here as Embainhada 1 and 2, and Dirofilaria immitis. For domestic dogs, only Acanthocheilonema sp. was diagnosed. These data are unprecedented for the region under study, since the knowledge about filaridae of wild animals from the Neotropical region is limited. It is important to note that ring-tailed coatis showed a high prevalence of filarids infection (74.5%), and can act as good reservoirs for these nematodes in the studied region. Some of the identified genera are described as zoonotic parasites in other regions of Brazil and the world, warning to the need for health surveillance, once these parasites may also have zoonotic potential in this area. Regarding trypanosomatids, only L. infantum was detected in domestic dogs from Foz do Iguaçu city, although positive dogs were identified in the IIFT for L. infantum (28.7%) in some rural properties surrounding the PARNA. Trypanosoma cruzi was also identified in a ring-tailed coati from Iguazu Falls tourist area and was typified as T. cruzi DTU’s TcIV. We can suggest that domestic dogs are the important visceral leishmaniasis reservoirs in Foz do Iguaçu, PR, requiring vigilance and actions to control vectors and domestic reservoirs aiming to prevent the parasite in wild mammals from PARNA Iguaçu because them can be amplified (spillback) in the many susceptible host species that inhabit the Atlantic forest of PARNA Iguaçu. The presence of T. cruzi in ring-tailed coatis is an alert, these animals act as good sentinels of the wild environment, and in this way, demonstrating that T. cruzi is circulating in the forest area. The data obtained in this research indicate the occurrence and circulation, in PARNA Iguaçu, of vector-borne parasites that are of great importance for public health worldwide. Furthermore, it is possible to suggest that domestic dogs are responsible for maintaining the circulation of L. infantum, while coatis are excellent reservoirs for filarid nematodes and can also act as reservoirs for T. cruzi in the PARNA Iguaçu region, as already reported for other Brazilian biomes, being an important sentinel animal to be monitored by health surveillance agencies in the studied region.