Preparo e caracterização de membrana de fibrina rica em plaquetas e leucócitos com sangue de gatos da raça maine coon

Abstract

O objetivo do estudo foi preparar e caracterizar, por meio de análise histológica, imuno-histoquímica e microscopia eletrônica de varredura (MEV), a membrana de fibrina rica em plaquetas e leucócitos (L-PRF) produzida com sangue de gatos da raça Maine Coon. Foram utilizados 13 gatos adultos saudáveis, conforme critério de inclusão, com peso variando entre 3,1 kg e 7,5 kg, dos quais foi coletado sangue da veia jugular externa com escalpe 21G e tubo plástico siliconizado à vácuo. Dois tubos com 3 mL de sangue cada um foram centrifugados imediatamente à coleta, empregando centrífuga especializada para esta aplicação, 650 g por 12 minutos. O coágulo de L-PRF foi retirado do tubo utilizando uma pinça e com uma espátula foi cuidadosamente escarificado para retirar o máximo de células vermelhas, preservando a região do “buffy coat” (camada celular). Na sequência o coágulo de L-PRF foi posicionado sobre a malha metálica perfurada e comprimido com a tampa, por 30 a 60 segundos, obtendo-se a membrana de L-PRF. Pela análise histológica com a coloração Hematoxilina e Eosina foi possível distinguir as três porções que compunham a membrana: parte branca, “buffy coat” e parte vermelha. A área do “buffy coat” continha a maior concentração de leucócitos. A análise imuno-histoquímica demonstrou a expressão do fator de crescimento do endotélio vascular e do fator de crescimento derivado de plaquetas. Pela MEV verificou-se a arquitetura tridimensional da rede de fibrina. Na área do “buffy coat” a morfologia das células estava preservada, sendo composta principalmente de leucócitos e plaquetas. Como conclusão, a metodologia empregada permitiu caracterizar a composição da membrana de L-PRF em gatos Maine Coon, que apresenta tipos celulares e arquitetura de rede de fibrina similares ao descrito para a espécie humana.

This study aimed to prepare and characterize by using histological analysis, immunohistochemical, and Scanning Electron Microscopy (SEM) a Leukocyteand Platelet-Rich Fibrin membrane (L-PRF) produced with blood from Maine Coon cats. Based on inclusion criteria, 13 client-owned healthy adult cats weighing from 3.1 kg to 7.5 kg were enrolled. The blood samples were collected from the external jugular vein using a butterfly catheter (21G) and vacuum plastic tube without additives. Two tubes with 3 mL of blood per tube were immediately centrifuged at 650g for 12 minutes using a centrifuge specifically designed for this application. The L-PRF clot was removed from the tube with tweezer and a spatula which was used to separate it from the red blood cell base layer leaving the buffy coat intact. After this, the L-PRF clot was compressed by specialized metal plate for 30 a 60 sec, and L-PRF membrane was obtained. Light microscopy examination of the membranes stained with hematoxylin-eosin showed three distinct layers: white part, buffy coat and red part. The buffy coat contained a high density of leukocytes. Immunohistochemical analysis demonstrated expression of vascular endothelial growth factor and plateletderived growth factor. The SEM revealed the three-dimensional architecture of the fibrin network. The cells of buffy coat showed adequate cellular morphology, being composed mainly of white blood cells and platelets. In conclusion, the method used allowed the characterization of the L-PRF membrane composition in Maine Coon cats, which presented cell types and fibrin network architecture similar to that described for the human species.