Investigação da neuroproteção mediada pela SUMOilação na doença de Parkinson

Abstract

A doença de Parkinson (DP) é um distúrbio neurodegenerativo caracterizado por rigidez muscular, tremor em repouso, bradicinesia e instabilidade postural em que ocorre uma perda progressiva de neurônios dopaminérgicos, reduzindo a concentração de dopamina no estriado. Atualmente a L-3,4-dihidroxifenilalanina (L-DOPA) é o fármaco mais utilizado para tratar a DP, porém o tratamento a longo prazo pode acarretar discinesias. Portanto, novas terapias são extremamente necessárias e para isto torna-se importante compreender os mecanismos patofisiológicos envolvidos. A SUMOilação, é uma modificação pós-traducional (MPT) de proteínas que exerce papel neuroprotetor em modelos de estresse celular e tem sido considerada um fator crítico em diversas doenças neurodegenerativas. Mecanismos envolvendo silenciamento gênico vêm sendo utilizados para modular proteínas envolvidas na SUMOilação, como por exemplo, a enzima de-SUMOilante SENP3. O objetivo deste trabalho foi determinar o efeito do knockdown de SENP3 na via da SUMOilação, com foco na única enzima conjugante, Ubc9, bem como em proteínas-alvo importantes na DP, como a proteína envolvida na homeostase mitocondrial, Drp1. Foram cultivadas células HEK293A para produção do vetor lentiviral e células SH-SY5Y para avaliação do knockdown de SENP3, seguido de dot blotting para as proteínas de interesse. Além disso, um modelo in vitro da DP, utilizando fatias estriatais de ratos expostas a 6-hidroxidopamina (6-OHDA) foi padronizado no laboratório. O knockdown da SENP3, embora não altere os níveis de Drp1, aumenta os níveis da enzima SUMOilante Ubc9, sugerindo um papel neuroprotetor para estas manipulações genéticas, o que será futuramente testado no modelo in vitro de DP.