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Purification and Electrophoretic Behavior of Sugarcane Invertases
Título en español.
Registro en:
10.46429/jaupr.v51i1.11217
Institución
Resumen
A fair degree of sugarcane invertase purification has been achieved by techniques of differential solubility, gel filtration, and paper electrophoresis. Invertase is readily salted out with ammoniun sulfate between 38- and 52- percent saturation. Activity is largely lost during dialysis against distilled water, but is regained by passage through columns of G-200 Sephadex gel. Reactivation is attributed to removal of unknown inhibitors. Filtration did not accomplish good separation of invertase from other protein. Electrophoresis experiments showed that invertases are quite mobile compared to contaminant protein, and move quickly toward positive and negative electrodes. Two distinct invertase areas were obtained free of contaminant protein, one enzyme bearing a positive charge and the other a negative charge. Filtration and electrophoresis steps described herein achieved good enzyme purification without use of glucose or manganese, and thus avoided the appearance of reconstituted invertase. Mediante las técnicas de solubilidad diferencial, filtración de gel y la electrofóresis de papel se ha obtenido un buen grado de purificación de la invertasa de la caña de azúcar. La invertasa puede separarse rápidamente con sales de sulfato amónico a una saturación de un 38 a un 52 por ciento. La actividad desaparece casi totalmente durante la diálisis can agua destilada, pero se restablece pasándola a través de columnas de gel Sephadex G-200. Se atribuye la reactivación a la remoción de inhibidores desconocidos. No fue posible separar bien la invertasa de otras proteínas mediante la filtración. Las pruebas de electrofóresis demostraron que las invertasas son bastante móviles comparadas con las proteínas contaminadoras, y se mueven con rapidez hacia los electrodos positivo y negativo. Se obtuvieron dos distintas áreas de invertasa libres de proteína contaminadora, una de las cuales se comprobó tener una carga positiva y otra una carga negativa. Los procesos de filtración y electrofóresis, ya descritos, permitieron una buena purificación de las enzimas, sin que fuera necesario usar glucosa o manganeso, evitando así la aparición de la invertasa reconstituida.