Gel filtration studies were conducted with sugarcane leaf-protein preparations bearing strong phosphatase activity. The objectives were to isolate phosphatases from contaminant protein, and from one another. Sephadex, a dextran gel possessing variable sieving properties, was employed in 1.5 X 25-cm. columns packed and eluted with water or buffer. Good resolution of enzyme and protein constituents was obtained. Collecting 1-ml. fractions during a typical filtration, major phosphatase activity was gathered in fractions 8 to 10, while the mass of noncatalytic protein trailed behind in fractions 19 to 24. The filtration process also served to remove such inhibitors as molybdenum and tungsten, permitting partial reactivation of inhibited enzyme. Attempts to separate phosphatases from one another by gel filtration and paper electrophoresis were negative. It was concluded that sugarcane leaf phosphatases have nearly identical properties with regard to solubility, molecular size and type of charge. A powerful protein-protein binding is also suspected among different phosphatases.Se hicieron estudios de filtración de gel, con preparaciónes de proteínas extraídas de las hojas de la caña de azúcar en las que la fosfatasa se mostró muy activa. Los objetivos eran aislar las fosfatasas para evitar que se contaminaran con proteína, y separar las unas de las otras. Para este fin se usó Sephadex, gel de dextran que al actúar de colador posee propiedades variables, en columnas de 1.5 X 25 cm., diluido con agua o con un agente amortiguador. Se logró una buena separación de la enzima y las proteínas. Al recoger fracciones de 1 ml. durante una filtración típica, la actividad mayor de la fosfatasa se obtuvo en las fracciones del 8 al 10, mientras que la masa de la proteína no-catalítica quedó rezagada en las fracciones del 19 al 24. El proceso de filtración también sirvió para remover inhibidores, tales como el molibdeno y el tungsteno, permitiendo así la reactivación de la enzima inhibida. Fueron negativos los esfuerzos por separar las fosfatasas, una de la otra, mediante la filtración de gel y por electrofóresis de papel. Se llegó a la conclusión de que las fosfatasas de la hoja de la caña de azúcar poseen propiedades casi idénticas respecto a solubilidad, tamaño de las moléculas y tipo de carga. Se sospecha, además, que entre las diversas fosfatasas existe une extraordinaria fuerza de vinculación que une proteína a proteína.