El objetivo de este trabajo fue determinar la seroprevalencia del virus de la leucemia bovina (VLB) en rodeos lecheros de la Provincia de Santa Fe. Se procesaron 747 muestras mediante la técnica de inmunodifusión en gel de agar. Se realizó un análisis chi-cuadrado para evaluar la asociación entre la categoría y la general, que fue del 79,1%, siendo la prevalencia por categorías de 82,1% para vacas, 56,2% para vaquillonas y 54,5% para toros. En el análisis estadístico se observó una asociación de seropositividad. Los resultados de prevalencia intra-predial fueron entre el 63% y el 96%. La prevalencia estadísticamente significativa entre adultos y seropositividad, fue teniendo éstos 4 veces más chances de ser seropositivos que las vaquillonas. La elevada seroprevalencia del VLB hallada, demuestra que el virus está ampliamente distribuido en los rodeos lecheros de la región sur de la Provincia de Santa Fe.