El maíz es un cereal originario del sur de México y norte de Guatemala, (Doolitle y Mabry, 2006). En Venezuela, forma parte vital de la dieta de la población, alcanzando en el año 2014 1.930.808 de toneladas de producción (FEDEAGRO, 2016). Sin embargo, el desarrollo de malezas representa un factor limitante de suma importancia para su producción (Rodríguez, 2000), siendo el uso de herbicidas la estrategia más común para su manejo (Zita, 2012). El nicosulfuron (sulfonilureas), quien inhibe la acción de la enzima acetolactato sintetasa (ALS), es utilizado desde 1989 para el control de malezas en maíz a nivel mundial por ser un herbicida selectivo al cultivo (Carriquiry y Ríos, 2007). La tolerancia del maíz a las sulfonilureas se debe a la acción del complejo enzimático citocromo P450 monoxígenasa (Pataky y Meyer, 2008). En la producción de semillas no se recomienda la aplicación de herbicidas sulfonilureas debido a los diferentes grados de susceptibilidad que presentan las líneas progenitoras de los híbridos (Stefanovic et al., 2010). Con la finalidad de evaluar y caracterizar la tolerancia diferencial de algunos progenitores e híbridos de maíz amarillo del programa de mejoramiento genético de SEHIVECA e HIMECA al nicosulfuron, se realizó un ensayo de campo así como pruebas de respuesta a dosis, inhibición de la enzima P450 (con clorpirifos, malation y metomilo) y una evaluación con marcadores moleculares RADP. Se encontró un genotipo (padre del hibrido SK-5050) altamente susceptible y otro (madre de hibrido SK-5050) altamente tolerante al nicosulfuron. Se obtuvo una posible asociación de la susceptibilidad al herbicida con una banda RAPD, así como evidencias claras de sinergismo al combinar nicosulfuron con el insecticida clorpirifos. Se demostró la naturaleza metabólica de la tolerancia al nicosulfuron en los cultivares de maíz bajo estudio. Se generaron recomendaciones para la producción de semillas de diversos cultivares.