Estudio de la purificación de proteasomas humanos y de su modulación por electrófilos

Abstract

La investigación aquí expuesta se basa en la existencia de un solapamiento de los sistemas de señalización inmune y metabólico a través del sistema ubiquitina-proteasoma (SUP) y en evidencias que señalan la susceptibilidad del SUP a oxidantes y electrófilos. Por lo tanto, la hipótesis del presente trabajo fue que los electrófilos pueden modular la actividad dependiente de ATP del proteasoma 26S actuando directamente sobre las partículas reguladoras. El proyecto presenta dos grandes partes: el estudio de la purificación de proteasomas a partir de eritrocitos humanos y el análisis de su regulación por electrófilos en presencia de distintas concentraciones de ATP. En la primera parte, se implementó una purificación parcial de proteasomas, se caracterizó la muestra mediante ensayos de actividad con sustratos e inhibidores específicos, así como mediante geles de poliacrilamida y espectrometría de masa. En la segunda instancia, se estudió la dependencia de la actividad tipo quimotripsina en función de la concentración de la muestra enriquecida en proteasomas, de electrófilos y de ATP. Se obtuvieron evidencias fuertes de la presencia y función de proteasomas 26S en la muestra y sugerencias acerca de la formación de complejos proteasomales mixtos 26S con Valosin-Containing Protein (VCP). Los resultados indicaron que la actividad del proteasoma es regulable por los electrófilos ensayados con IC50, que dependerían de la concentración de ATP. Se concluyó que los electrófilos ensayados son capaces de modular la actividad tipo quimotripsina del proteasoma 20S y 26S.