Aislamiento de protoplastos del mesofilo del género Coffea

Abstract

Se describe un método rápido pare el aislamiento de protoplastos a partir de hojas de café, probándose diferentes enzimas en varias combinaciones. Es posible liberar abundante cantidad de protoplastos a partir de hojas jóvenes, provenientes de varias líneas y cruzamientos. de las especies Coffea arabica y C canephora mediante su incubación durante 4 horas en celulasa (3%), pectoliasa (0 5%) y manitol (0 6 motel) a pH 5.8. Los protoplastos se filtraron y lavaron varias veces en agua de mar (85%), y fue necesario resuspenderlos en percoll (70%) debido a su densidad. Los protoplastos sobreviven varias semanas. y regeneran pared celular. En uno de los medios (A 43), después de 2 semanas se observan algunas divisiones. Se están probando varias medios de cultivo con diferentes concentraciones de hormonas.

A rapid method for the isolation of protoplasts from coffee leaves is described, testing different enzymes in various combinations. An abundant amount of protoplasts can be released from young leaves from various lines and crosses of Coffea arabica and C canephora species by incubating them for 4 hours in cellulase (3%), pectolyase (0 5%) and mannitol (0 6 motel) at pH 5.8. Protoplasts were filtered and washed several times in seawater (85%), and resuspension in percoll (70%) was necessary due to their density. The protoplasts survive for several weeks and regenerate cell wall. In one of the media (A 43), after 2 weeks some divisions are observed. Several culture media with different hormone concentrations are being tested.