Mutaciones en los genes codificantes de topoisomerasa IV y su rol en la resistencia a fluoroquinolonas en cepas clínicas de bacilos gram negativos.

Abstract

Las quinolonas son un grupo de antibióticos sintéticos que han sido usados por más de 40 años en el tratamiento de infecciones hospitalarias y de la comunidad. El masivo uso de estos compuestos ha seleccionado bacterias resistentes a ellos y el principal mecanismo de resistencia corresponde a mutaciones en los genes que codifican para las subunidades de las enzimas blanco ADN girasa y topoisomerasa IV. El objetivo de esta tesis fue detectar mutaciones en los genes codificantes de topoisomerasa IV en cepas hospitalarias resistentes y susceptibles a fluoroquinolonas. Se incluyeron 89 cepas de las especies Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii y Pseudomonas aeruginosa, resistentes a ácido nalidíxico, aisladas entre los años 1990 y 2003, en diferentes hospitales chilenos. Además, se disponía de información acerca de la concentración de mínima inhibitoria (CMI) de fluoroquinolonas. Se realizó la amplificación de la región determinante de resistencia a las quinolonas, ubicada en los genes codificantes de topoisomerasa IV, mediante PCR. Posteriormente, se realizó la digestión de los productos de PCR con enzimas de restricción que poseían un sitio de corte cercano a los codones en los que se ha descrito mutaciones con mayor frecuencia. Además, se realizó la secuenciación de los productos de PCR de algunas cepas, seleccionadas por sus distintos patrones de restricción.