dc.contributor | Vera Cárcamo, Juan Carlos; supervisor de grado | |
dc.creator | Lamperti Fernández, Liliana | |
dc.date.accessioned | 2021-04-01T19:25:58Z | |
dc.date.available | 2021-04-01T19:25:58Z | |
dc.date.created | 2021-04-01T19:25:58Z | |
dc.date.issued | 2009 | |
dc.identifier | http://repositorio.udec.cl/jspui/handle/11594/4877 | |
dc.description.abstract | El receptor LOX-1 para lipoproteínas de baja densidad oxidada (oxLDL),pertenece a la familia de receptores scavenger para oxLDL ligados a lectina, y parece ser fundamental en el desarrollo de lesiones ateromatosas. Su expresión ha sido demostrada en células endoteliales, células musculares lisas y en macrófagos, pero no existe evidencia de expresión de LOX-1 en células tumorales. Estudios iniciales en nuestro laboratorio indicaron abundante expresión de una proteína reactiva con un anticuerpo policlonal anti-LOX-1 en células de carcinoma prostático DU-145.
El objetivo central de este tesis fue establecer que las células de cáncer prostático humano DU-145 expresan un receptor de lipoproteína oxidada, LOX-1, funcional. Para ello, estudiamos la expresión, localización y actividad funcional del receptor LOX-1 en las células DU-145, luego clonamos el ADNc codificando la secuencia completa de LOX-1 a partir de estas células, seguido de sobreexpresión y análisis de su localización y función en células humanas HEK-293.
Específicamente, examinanos la expresión de LOX-1 en células DU-145 por PCR,comparándola con la expresión en células endoteliales de vena umbilical humana, en macrófagos activados THP-1 y en células embrionarias de riñón humano HEK-293.
Estudiamos la localización de la proteína LOX-1 por medio de un anticuerpo anti-LOX-1 dirigido al extremo C-terminal extracelular de la proteína. Examinamos la función de LOX-1 en ensayos de internalización de oxLDL marcada con Dil y en experimentos de perdida de adhesión en células tratadas con oxLDL. Finalmente, clonamos el receptor LOX-1 a partir de ARNm aislado desde células THP-1 y DU-145 y construimos quimeras con la proteína fluorescente verde (GFP), para estudiar la localización y dinámica subcelular en respuesta al ligando oxLDL.
Los resultados de este estudio demostraron que las células DU-145 expresan elevados niveles de LOX-1 que se encuentra localizado principalmente a nivel de la membrana plasmática. Los estudios funcionales mostraron que las células DU-145 responden a la exposición de oxLDL aumentando la expresión de LOX-1 y pierden su adherencia a la placa de cultivo. Los ensayos con Dil-oxLDL mostraron una mayor internalización en células DU-145 que en células THP-1, respuesta que fue negativa en células HEK-293 controles y fue bloqueada por anticuerpos anti-LOX-1. Con respecto al clonamiento del receptor LOX-1, se obtuvo el ADNc proveniente de células DU-145, el que mostró un 100% de identidad en la secuencia con LOX-1 humano. La sobreexpresión de LOX-1 de orígen prostático en células HEK-293 les otorgó la capacidad de responder a oxLDL con perdida de su adherencia celular y ganancia de la capacidad para
internalizar Dil-oxLDL.
Nuestros resultados indican que las células DU-145 expresan un receptor LOX-1 auténtico, capaz de unir en forma específica al ligando oxLDL. La unión de oxLDL al receptor induce cambios en la función de las células que lleva a la internalización del complejo ligando-receptor y promueven la perdida de la adherencia celular. Esto genera la pregunta de si LOX-1 tiene un papel que jugar en cáncer durante la propagación tumoral y metástasis. | |
dc.language | spa | |
dc.publisher | Universidad de Concepción. | |
dc.publisher | Facultad de Ciencias Biológicas | |
dc.publisher | Departamento de Biología Celular y Molecular. | |
dc.rights | https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/deed.es | |
dc.rights | Creative Commoms CC BY NC ND 4.0 internacional (Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional) | |
dc.source | https://go.openathens.net/redirector/udec.cl?url=http://tesisencap.udec.cl/concepcion/sala-chile/lamperti_l_f/index.html | |
dc.subject | Células Cancerosas | |
dc.subject | Células Endoteliales | |
dc.subject | Receptores Celulares. | |
dc.title | Expresión y función del receptor LOX-1 en células humanas normales y tumorales. | |
dc.type | Tesis | |