Copper is an essential cofactor for aerobic respiration, since it is required as a redox cofactor in Cytochrome c Oxidase (COX). This ancient and highly conserved enzymatic complex from the family of heme-copper oxidase possesses two copper sites: CuA and CuB. Biosynthesis of the oxidase is a complex, stepwise process that requires a high number of assembly factors. In this review, we summarize the state-of-the-art in the assembly of COX, with special emphasis in the assembly of copper sites. Assembly of the CuA site is better understood, being at the same time highly variable among organisms. We also discuss the current challenges that prevent the full comprehension of the mechanisms of assembly and the pending issues in the field.Para citar este articulo: Llases, M.-E.; Morgada, M.N.; Vila, A.J. Biochemistry of Copper Site Assembly in Heme-Copper Oxidases: A Theme with Variations. Int. J. Mol. Sci. 2019, 20, 3830. https://doi.org/10.3390/ijms20153830Fil: Lllases, María Eugenia. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario (IBR -CONICET); Argentina.Fil: Morgada, Marcos N. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario (IBR -CONICET); Argentina.Fil: Morgada, Marcos N. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Departamento de Química Biológica. Área Biofísica; Argentina.Fil: Vila, Alejandro J. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario (IBR -CONICET); Argentina.Fil: Vila, Alejandro J. Plataforma de Biología Estructural y Metabolómica (PLABEM); Argentina.Fil: Vila, Alejandro J. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Departamento de Química Biológica. Área Biofísica; Argentina.