Los isómeros racémicos del propranolol han sido separados enzimáticamente a partir del éster fenilacético del propranolol, el cual fue previamente sintetizado y caracterizado por técnicas cromatográficas y de elucidación estructural. La hidrólisis de este producto con penicilina G acilasa (CE 3.5.1.11) de Escherichia coli se llevó a cabo en sistemas acuosos con un 20% de cosolvente. La enzima se utilizó inmovilizada sobre soporte de sepharosa CL 6B, en presencia y ausencia de inhibidor. La reacción se siguió por cromatografía líquida de alta resolución (CLAR) utilizando el sistema de disolvente seleccionado en el análisis cromatográfico. Se obtuvo una elevada enantioselectividad hacia el isómero R cuando se utilizó la penicilina G acilasa inmovilizada en presencia de inhibidor.The raceinic propranolol isomers had been enzymatically separated starting from propranolol phenylacetic ester. This compound was synthesized and characterized by chromatographic and structural elucidation technics. The penicillinacylase from Esclzerichia coli was immobilized on sepharose CL 6B support using or not an inhibitor. The hydrolysis with this enzyme was carried out in aqueous solutions containing 20% of cosolvent. The reaction was followed by HPLC analysis using the more suitable solvent system. A high enantioselectivity to (R) isomer was obtained when the penicillinacylase was immobilized in presence of an inhibitor.