Subunidades Fksp del complejo beta-1,3- D-glucan sintasa de Candida glabrata: rol en la síntesis de la pared celular, en la resistencia a las equinocandinas y como marcadores de resistencia clínica

Abstract

Las infecciones causadas por levaduras del complejo Candida glabrata son un desafío terapéutico, ya que adquieren fácilmente resistencia a los triazoles y tienen sensibilidad reducida a los polienos. Por estas razones, las equinocandinas son el tratamiento de elección para estas infecciones. Las equinocandinas actúan inhibiendo el complejo beta-1,3-D-glucan sintasa que cataliza la síntesis de glucanos de pared. Este complejo incluye 2 subunidades, llamadas Rho1p y Fksp. La última subunidad está codificada por los genes FKS1, FKS2 y FKS3. La resistencia clínica a las equinocandinas en C. glabrata se ha relacionado estrictamente con mutaciones en dos regiones conservadas del Fksp. Además, existe la necesidad de desarrollar herramientas capaces de detectar cepas resistentes a las equinocandinas. Estos hechos nos hicieron plantear como uno de los objetivos principales de esta tesis doctoral el poder dilucidar la función Fks1p y Fks2p en C. glabrata y establecer su relación con la síntesis de la pared celular y la resistencia a las equinocandinas. Para concretar esto, produjimos cepas de C. glabrata defectuosas en los genes FKS y evaluamos la implicación de cada uno de ellos en la resistencia a la equinocandina y en la regulación de la síntesis de la pared fúngica. Además, se estableció el papel de la quitina en la compensación de los efectos de las alteraciones funcionales del complejo beta-1,3-D-Glucan sintasa. Por otro lado, se desarrollaron herramientas moleculares para el diagnóstico de resistencia secundaria a las equinocandinas en las cepas de C. albicans y C. glabrata

Candida glabrata complex infections are a therapeutic challenge as they easily acquire triazole resistance and have reduced susceptibility to polyenes. For these reasons, echinocandins are the treatment of choice for these infections. Echinocandin drugs act by inhibiting the beta-1,3-D-Glucan synthase complex that catalyzes fungal-wall-glucan synthesis. This complex includes 2 subunits, named Rho1p and Fksp. The last subunit is encoded by the FKS1, FKS2 and FKS3 genes. Echinocandin clinical resistance in C. glabrata has been strictly linked to mutations in two conserved regions of the Fksp. In addition, there is a need to develop tools capable of detecting echinocandin resistant strains. These facts made us raise the as one of the main objectives of this PhD thesis to establish the Fks1p and Fks2p function in C. glabrata and it relatedness with cell wall synthesis and echinocandin resistance. We produce C. glabrata strains defective in FKS genes and we evaluated the implication of each of them in echinocandin resistance and in the regulation of the fungal wall synthesis. In addition, the role of chitin in the compensation of the effects of the functional alterations of the beta-1,3-D-Glucan synthase complex was established. In the other hand, molecular tools for the diagnosis echinocandin secondary resistance in C. albicans and C. glabrata strains, were developed.