Tese de doutorado
Especificidade das oligopeptidases timet oligopeptidase(EC3.4.24.15) e neurolisina(EC 3.4.24.16)
Fecha
2002Registro en:
São Paulo: [s.n.], 2002. 105 p. ilustab.
epm-017715.pdf
Autor
Oliveira, Vitor [UNIFESP]
Institución
Resumen
A compreensao do mecanismo pelo qual uma enzima atua sobre o seu substrato e fundamental para o entendimento de sua funcao nos organismos vivos. No caso das enzimas proteoliticas sua especificidade por determinado residuo de aminoacido contido na sequencia do substrato, especificidade primaria, e um aspecto essencial a ser conhecido a respeito desta classe de enzimas. Para o estudo da especificidade de peptidases a utilizacao de substratos sinteticos tem sido de fundamental importancia destacando-se os substratos com supressao intramolecular da fluorescencia que permitem o estudo das interacoes enzima-substrato de ambos os lados da ligacao peptidica hidrolisada. 0 presente estudo tem como objetivo central o estudo da especificidade de duas endooligopeptidases da familia M3 das metalo-peptidases, a timetoligopeptidase (EC 3.4.24.15) e a neurolisina (EC 3.4.24.16), atraves da determinacao de parametros cineticos, utilizando-se series de substratos com supressao intramolecular da fluorescencia. Estas duas peptidases alem de serem da mesma familia e apresentarem alta homologia entre suas sequencias de aminoacidos, atuam sobre varios peptideos biologicamente ativos, in nitro, hidrolisando a mesma ligacao peptidica, o que sugere que estas tenham sitios ativos muito semelhantes. Os resultados obtidos mostram que essas peptidases nao apresentam uma clara especificidade definida, em nenhuma das posicoes estudadas de P4 a Ps' diferindo da peptidase modelo do Cla, a termolisina. Por outro lado, o residuo em P1 mostrou-se de grande importancia principalmente em termos de constante catalitica. Durante nossos estudos desenvolvemos tambem substratos com supressao intramolecular da fluorescencia (ensaio continuo) especificos para a neurolisina chegando a uma seletividade -100 vezes em termos de k,adK,,, baseados na sequencia da neurotensina (NT) que e um dos poucos peptideos conhecidos que e hidrolisado em diferentes ligacoes pela TOP e pela neurolisina. Essa diferenca tem sido usada para diferenciar as atividades da TOP ou TOP-simile da neurolisina ou neurolisina-simile, porem requer ensaios descontinuos seguidos de...(au)