Efecto de la concentración de glucosa extracelular sobre la inducción de genes tempranos y ciclinas por estimulación con vasopresina en células de músculo liso vascular
Autor
Perdomo Martín, Guetón
Institución
Resumen
Arginina-vasopresina es una potente hormona vasoconstrictora que posee varias funciones biológicas, y que ha sido implicada en la generación de algunos tipos de hipertensión esencial. Nuestro interés fue estudiar las vías de señalización involucradas en la inducción de la transcripción de ciertos genes por AVP sobre células de músculo liso vascular, y la influencia de la concentración de glucosa sobre ellas. Para ello se cultivaron células A-10, que expresan el receptor V1 de vasopresina, en medios DMEM con concentraciones baja (5,6 mM) o alta (25 mM) de glucosa y se estimuló el cultivo con AVP por distintos tiempos y en presencia de distintos inhibidores. Determinamos la activación transcripcional de genes tempranos y de ciclinas mediante RT-PCR, observándose una inducción rápida y transitoria de ciclina B, egr-1 y c-fos en baja glucosa. La inducción de estos genes aumentó en presencia de una alta concentración de glucosa en el medio. Este proceso resultó ser dependiente de PKC en todos los casos. La inhibición de la vía de las MAPKs contrarrestó en gran medida la inducción ejercida por el estímulo hormonal. La inhibición de PI3K en tanto, afectó sólo a la inducción de c-fos, en condiciones de alta glucosa. Se demostró también la importancia de la transactivación del receptor de EGF en la inducción de estos genes. Estos hallazgos sugieren que el posible efecto proliferativo inducido por AVP está mediado por PKC observándose al menos dos vías distintas de señalización intracelular involucradas: la cascada de las MAPKs y la vía PI3K/Akt. Por otra parte, la concentración de glucosa en el medio de cultivo modula de manera importante el proceso de activación transcripcional. Arginine-vasopressin (AVP) is a potent vasoconstrictor hormone with a plethora of biological functions, namely renal water reabsorption and glycogen degradation in the liver. AVP has been also implied in some kind of essential hypertension. Our purpose was to investigate the signaling pathways involved in the transcriptional activation of genes after V1 vasopressin receptor activation in vascular smooth muscle cells, and how glucose concentration affects this process. For this, A-10 cells were grown in Low (5,6 mM glucose) or High (25 mM glucose) Glucose culture medium, stimulated with AVP for different times and in the presence of different inhibitors. We used RT-PCR to determine the transcriptional activation of early genes and also cyclins. We observed a rapid and transient induction of cyclins B and D1, Egr-1 and c-fos. This transcriptional activation was increased in HG conditions. This process was dependent on PKC in every case. MAPKs pathway inhibition reduced hormonal induction in various cases, and PI3K pathway was implicated only in HG conditions. To determine whether the transcriptional activation of these genes was due to EGF receptor transactivation we used the specific EGFR inhibitor AG1478. These findings suggest that the transcriptional activation induced by AVP is mediated by PKC and at least two other distinct intracellular signaling pathways, the MAPKs and the PI3K/Akt pathways. It is clear that glucose concentration in the medium affects importantly the transcriptional activation of these genes. It possesses an activating effect on the signal transduction mechanisms.