El presente trabajo se realizó en el Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales del Instituto de Producción y Sanidad Vegetal de la Universidad Austral de Chile. El objetivo de esta investigación fue determinar la factibilidad de propagar in vitro las especies medicinales ruda (Ruta graveolens L.), toronjil (Melissa officinalis L.) y cedrón (Aloysia tryphilla (L’ Her) Britton) y determinar el mejor medio de crecimiento para cedrón. El objetivo específico fue determinar la mejor combinación de fitohormonas a utilizar en los medios de cultivo de ruda, cedrón y toronjil. Se utilizó un diseño experimental completamente al azar para cada especie, ordenado como experimento factorial de dos factores: la concentración de ANA (3) y la concentración de BAP (3). En los tres ensayos de micropropagación, se evaluaron los siguientes parámetros: número y longitud de brotes, número y longitud de raíces, senescencia, vitrificación, porcentaje de callo y contaminación. Los resultados obtenidos se sometieron a un análisis de varianza y prueba de comparaciones múltiples de Tukey, fijando un nivel de probabilidades del 1 y 5%. Los datos porcentuales fueron modificados mediante la Ecuación de Bliss (arcsen √% /100). En el ensayo de ruda, los mejores resultados para las variables número y longitud de brotes se obtuvo con 1 mg/L de BAP. Para número y longitud de raíces, las mejores combinaciones de fitohormonas se obtuvieron en los tratamientos 0,1 mg/L de ANA y 0 mg/L de BAP o 0,2 mg/L de ANA y 0 mg/L de BAP. En el ensayo de toronjil, para la variable número de brote, la mejor combinación fue 0 mg/L de ANA y 1,0 mg/L de BAP. Para longitud de brote, la mejor respuesta fue la combinación 0 mg/L de ANA y 0 mg/L de BAP. Los tratamientos con 0,1 mg/L de ANA y 0 mg/L de BAP o con 0,2 mg/L de ANA y 0 mg/L de BAP fueron superiores en formación de raíces. Para longitud de raíces, la combinación 0,1 mg/L de ANA y 0 mg/L de BAP obtuvo los mejores resultados. En el ensayo de cedrón, el único resultado obtenido fue para la variable número de raíces, que fue mayor en explantes provenientes de ápices. La contaminación fue mayor en explantes provenientes de brotes. No hubo diferencias significativas entre explantes de brotes axilares o ápices para las demás variables.A research was carried out at the Plant Tissue Culture Laboratory of the Institute of Plant Production and Sanity of Universidad Austral de Chile, in order to resolve the feasibility of propagating in vitro the medicinal species rue (Ruta graveolens L.), lemon balm (Melissa officinalis L.) and lemon verbena (Aloysia tryphilla (L’ Her) Britton) and to find the best growth medium for lemon verbena. The specific objetive was to determine the best combination of plant growth regulators to be use in the culture media of the three species. A completely randomized experimental design was used, arranged as a factorial experiment, with two factors: NAA concentration (3) and BAP concentration (3). In the three experiments, corresponding to micropropagation, the parameters number and length of buds, number and length of roots, ageing, vitrification, callus porcentage and contamination was evaluated. Results were subjected to an analysis of variance and to Tukey ’s multiple comparison test, with a probability level of 1 and 5%. The percentage data were transformed by means of Bliss ’s Equation (arcsen√% /100). In the test of rue, the best results for the variables number and length of buds was obtained with 1 mg/L of BAP. For number and length of roots, the best combinations of plant growth regulators were obtained in the treatments 0,1 mg/L of NAA and 0 mg/L of BAP or 0,2 mg/L of NAA and 0 mg/L of BAP. In the experiment with lemon balm, for the variable number of buds, the best combination was 0 mg/L of NAA and 1,0 mg/L of BAP. For length of buds, the best response was combination 0 mg/L of NAA and 0 mg/L of BAP. The treatments using 0,1 mg/L of NAA and 0 mg/L of BAP or 0,2 mg/L of NAA and 0 mg/L of BAP were top in formation of roots. For length of roots, the combination 0,1 mg/L of ANA and 0 mg/L of BAP obtained the best results. In the experiment with lemon verbena, the only obtained result was for the variable number of roots, which was major by using shoot apexes. The contamination was major in explants of axillary buds. There were no significant differences between axillary shoots or apexes for the other variables.