Tesis
Estudio del efecto de la sobreexpresión de los pequeños RNAs reguladores de la familia Rsm en la prdducción de alginato en Azotobacter vinelandii
Fecha
2016-12Autor
MAY COMPAÑ, GABRIELA FERNANDA; 610916
May Compañ, Gabriela Fernanda
Resumen
Azotobacter vinelandii es una bacteria que produce polímeros de interés biotecnológico entre ellos encontramos los alginatos los cuales se utilizan en la industria farmacéutica y alimenticia para emulsificar, espesar, y dar viscosidad a soluciones acuosas. Gracias a lo anterior se ha generado interés en estudiar su biosíntesis y regulación. Su biosíntesis es regulada a través del sistema de doble componente GacS/GacA el cual está ligado a un sistema de regulación post – transcripcional Rsm. El sistema en A. vinelandii posee nueve pequeños RNAs (ocho de la subfamilia RsmZ y uno de la subfamilia RsmY), los cuales son reguladores positivos de la síntesis del alginato. En estudios previos se determinó que RsmZ1, al igual que RsmZ2 juegan un papel importante en la producción de alginato; en sus respectivas mutantes, disminuye aproximadamente el 80% de la síntesis del polímero. Sin embargo, aún queda resolver la incógnita si los demás sRNAs de la familia Rsm también están involucrados en la producción del polímero. Con la finalidad de realizar la sobreexpresión constitutiva de los genes que codifican para los sRNAs de la familia Rsm se construyó el vector integrativo pUMAgyrAKm, el cual se generó intercambiando el promotor inducible tac del vector previamente construido pUMAKmtac , por el promotor constitutivo gyrA, nativo de A. vinelandii. A este vector se le clonaron individualmente cada uno de los siguientes genes: rsmZ1, rsmZ2, rsmZ4, rsmZ5, rsmZ6 y rsmY, posteriormente se recombinaron en el genoma de la cepa silvestre (AEIV) en el locus neutro de recombinación (melA). A estas recombinantes se les generó una mutación en el gen gacA y se midió en cada una de ellas la producción de alginato. La mutante gacA no expresa ninguno de los sRNAs de la familia Rsm; de esta forma al expresar de manera independiente de GacA un sRNA estamos viendo el efecto regulador de este sRNA en particular. Por medio de este sistema así construido fue posible sobreexpresar a los sRNAs a partir del promotor gyrA, y se determinó que los sRNAs RsmZ6 y RsmY, al igual que RsmZ1, regulan positivamente la producción de alginato