Caracterización de la lacasa obtenida por dos métodos de producción con pleurotus ostreatus

Abstract

El objetivo de este trabajo fue caracterizar y evaluar diferentes métodos de purificación y separación cromatográfica de un caldo rico en enzima lacasa, producida por una variedad del basidiomycete Pleurotus ostreatus. Se llevaron a cabo dos procesos de producción, a saber: a) FES (Fermentación en Estado Sólido); b) fermentación en sumergido. El proceso de FES se basó en la producción de un extracto de caldo crudo rico en enzima lacasa a partir del crecimiento micelial sobre salvado con vinaza en relación 1:1 w/v duran te 20 días. Se obtuvo un caldo crudo con una actividad promedio de 20 U/ml. En el caso del proceso de fermentación en sumergido, se trabajó con el medio reportado por Hublick y Schinner (2000) con algunas modificaciones, y se obtuvo un crecimiento del hongo en forma de pellets, en un período de 15 días, con actividad promedio de 10 U/ml en el caldo crudo. Las isoenzimas aisladas en los procesos cromatográficos se caracterizaron de acuerdo a sus propiedades moleculares y cinéticas, se determinó su peso molecular por electroforesis de placa vertical (SDS-PAGE) y sus parámetros cinéticos, por ejemplo estabilidad, en un rango de temperatura y pH. Palabras clave: lacasa; Pleurotus ostreatus; fermentación en estado sólido (FES); fermentación en sumergido; isoenzimas; laccase; Pleurotus ostreatus; Solid State Fermentation (SSF); Submerged Fermentation; isoenzymes

This project was designed for characterising and evaluating different methods of chromatographic separation and purification regarding a laccase enzyme-rich broth produced by Pleurotus ostreatus, a variety of basidiomycetes. SSF (Solid State Fermentation) and Submerged Fermentation production processes were employed. The SSF process was based on producing a raw broth rich in laccase enzyme from mycelium grown on bran with 1:1 vinasse w/v for 20 days. A raw broth was obtained having an average 20 U/ml activity. The medium reported by Hublick and Schinner (2000) was used, with a few modifications, for the Submerged Fermentation process; the growth of pellet-shaped fungus was obtained within 15 days, having an average 10 U/ml activity in the raw broth. The isoenzymes isolated in the chromatographic processes were characterised according to their molecular and kinetic properties; their molecular weight was determined by SDS-PAGE vertical electrophoresis and their kinetic parameters (such as stability) expressed in a range of temperatures and pH.