Evaluación de la regeneración axonal en ratas con sección medular aguda y crónica después del trasplante con células de la glía envolvente olfatoria Y Afgf

Abstract

La lesión medular es un evento catastrófico, que afecta no sólo al paciente sino a los miembros de la familia y a la sociedad(DeVivo and Chen, 2011)(DeVivo and Chen, 2011)(DeVivo and Chen, 2011)(DeVivo and Chen, 2011)(DeVivo and Chen, 2011). Para el tratamiento de esta patología se han probado diversas terapias entre las cuales está la terapia celular con células de la glía envolvente olfatoria (CGEO). Éstas se han probado en diversos modelos de lesión medular aguda, sin embargo, la combinación con aFGF no ha sido evaluada en lesión crónica. En este trabajo se probó la combinación de CGEO+aFGF en un modelo de lesión medular completa en ratas en las fases aguda y crónica de la lesión. Se usaron 28 ratas Wistar machos SPF, (14 con lesión crónica y 14 con lesión aguda) que se sometieron a cirugía de laminectomía y sección medular completa. Las ratas de lesión aguda se trasplantaron en el mismo acto quirúrgico de la lesión; las ratas de lesión crónica se sometieron a una segunda cirugía, sesenta días después, en la cual se aplicó el trasplante de CGEO+aFGF. Mediante evaluaciones funcionales, durante 75 días post trasplante, se demostró que las ratas trasplantadas presentaron recuperación motora y sensitiva tanto en la fase aguda como en la crónica, mostrando puntajes variables en la escala motora BBB (entre 4 y 14) y mayor agarre en la rejilla, en comparación con las ratas de los grupos control las cuales no tuvieron recuperación funcional. La evaluación por microscopía confocal demostró que el trasplante indujo regeneración de axones en los segmentos craneal y caudal de la lesión, así como en el epicentro de la misma, donde se observaron axones regenerados atravesando la cavidad y uniendo los segmentos. El trasplante también disminuyó la cicatriz glial y el tamaño de los AS reactivos. El análisis ultraestructural demostró la presencia de focos de remielinización en los animales trasplantados en las dos fases de la lesión. Estos focos de remielinización se caracterizaron por tener morfología compatible con mielina central y periférica. Estos resultados confirman el efecto positivo del trasplante de CGEO+aFGF en inducir recuperación en lesión medular y abren el paso a nuevos etapas para su aplicación en terapia celular y reparación nerviosa.

ABSTRACT Spinal cord injury is a catastrophic event, which affects not only the patient but the members of the family and society. To treat this pathology they have tested various therapies among which is cellular therapy with olfactory ensheathing cells (OEC) is an alternative. These cells have been tested on various models of acute spinal cord injury; however, the combination with aFGF has not been evaluated. within this work a combination of OEC +aFGF was tested in a complete spinal cord injury model in rats on acute and chronic phases of injury. 28 SPF Wistar rats (14 with chronic injury and 14 with acute injury) were subjected to laminectomy and complete section of the spinal cord. A transplant was performed in acutely injured rats during the same surgical procedure of the lesion; chronically injured rats underwent a second surgery, sixty days later, in which the OEC +aFGF transplant was also performed. Functional evaluations (during 75 days post transplant) showed that after transplants rats had sensory and motor recovery on both the acute and chronic phase, showing varying scores on the BBB motor scale (between 4 and 14) and extra grip on thebars from the cage compared with rats from the groups control which had no functional recovery. Evaluation by using confocal microscopy demonstrated that transplantation induced regeneration of axons in the cranial and caudal segments of the lesion but also in the epicenter, where regenerated axons were observed throughout the cavity joining the segments. Transplantation also decreased the size of reactive astrocytes and glial scar. Ultrastructural analysis showed the presence of foci of remyelination in animals transplanted in the two phases of the lesion. These foci of remyelination were characterized by having compatible morphology of central and peripheral myelin. These results confirm the positive effect of OEC+aFGF transplantation in spinal cord injury and lay the path to new stages in its application in cellular therapy and neural repair.