Determinación de los efectos antihipertensivos de fracciones aisladas de Passiflora quadrangularis L. en murinos

Abstract

El objetivo del presente trabajo fue establecer el efecto cardiovascular de fracciones y compuestos aislados de Passiflora quadrangularis L. Para ello se realizó el fraccionamiento e identificación de compuestos del extracto etanólico mediante cromatografía flash en columna como técnica de separación y RMN como técnica de identificación estructural. Posteriormente se estudió la actividad antihipertensiva in vivo a través de la administración oral de E, FD, FM a 75mg/kg/día y C (sin tratamiento) en ratas SHR. Los valores PAS se obtuvieron con el método de maguito en cola durante 6 semanas. El peso de cada animal fue registrado semanalmente. Los órganos (corazón, aorta, mesenterio, riñón y plasma) de las ratas SHR tratadas fueron retirados después del sacrificio para realizar ensayos de funcionalidad (curvas concentración respuesta de ACh, NPS y PE), estudios morfométricos e histológicos, peroxidación lipídica y determinación de anión superóxido. Finalmente, las fracciones y compuestos obtenidos del fraccionamiento químico son evaluadas en órgano aislado con ratas normotensas Wistar. El mecanismo de acción de los compuestos con efecto vasodilatador es estudiado con antagonistas específicos como: L-NAME (100 µM), ODQ (30 µM), indometacina (1 µM), propranolol (1 µM) y atropina (30 µM) en anillos íntegros y los compuestos con efecto vasoconstrictor con: verapamilo (10 y 100 µM), yohimbina (1 y 100 µM), fentolamina (1µM) y prazosina (1 µM) en anillos sin endotelio. El efecto endotelio dependiente e independiente se evaluó con curvas concentración respuesta de ACh y NPS en anillos íntegros. En el fraccionamiento fitoquímico se identificaron 9 compuestos: (1) Estigmasterol, (2) linolenato de glicerilo, (3) ácido 3-O--D-glucopiranosilestigmasterol, (4) 3-O-β-Dglucopiranosil oleanólico, (5) ácido 3-O-β-D-glucopiranosil-(1→2)- β -D-glucopiranosil oleanólico, (6) 2’’-O-xilopiranosil vitexina, (7) 9,19-ciclolanost-24Z-eno-1β, 3β, 21, 26tetraol-3, (8) 26-di-O-β-glucósido, 9,19-ciclolanost-24Z-eno-3β,21,26β-triol-3-O-βgentibiósido-26-O-β-glucopiranósido, (9) ácido Ɣ-aminobutírico. A nivel in vivo todos los tratamientos administrados demostraron ser efectivos en el control de la presión arterial y en los estudios de funcionalidad mejoraron la capacidad relajante de ACh en aorta, mesenterio y riñón. De los estudios histológicos se observó disminución de la fibrosis cardiaca y vascular, así como tendencia a disminuir la producción de ROS ocasionadas por la hipertensión. Los compuestos 4 y 5 tiene efecto vasoconstrictor relacionado con la activación de VOCC a nivel extracelular y receptores α2 y el compuesto 6 y FD-8 tienen efecto vasodilatador dependiente de la vía NO/cGMP y activación de receptores muscarínicos.

Establishing the cardiovascular effect of fractions and isolated compounds of Passiflora quadrangularis L., was the aim of this work. For this purpose, fractionation and identification methods of ethanolic extract compounds were performed by flash column chromatography as a separation technique and NMR as a structural identification technique. Subsequently, in vivo antihypertensive activity was studied through oral administration of E, FD, FM at 75mg / kg / day and C (without treatment) in SHR rats. PAS values were obtained by tailcuff method carried out for 6 weeks. The weight of each animal was recorded weekly. Treated SHR rats´ organs (heart, aorta, mesentery, kidney and plasma) were removed after sacrifice for functional tests (response curves of ACh, NPS and PE), morphometric and histological studies, lipid peroxidation and superoxide anion´s determination. Finally, both fractions and compounds obtained from chemical fractionation are evaluated by isolated organ of normotensive Wistar rats. The mechanism of action of vasodilator compounds is studied using specific antagonists such as: L-NAME (100 µM), ODQ (30 µM), indomethacin (1 µM), propranolol (1 µM) and atropine (30 µM) in rings in full rings (with endothelium), and the mechanism of actions of vasoconstrictor compounds is studied using: verapamil (10 and 100 µM), yohimbine (1 and 100 µM), phentolamine (1 µM) and 1µM prazosin) in rings without endothelium. Independent and dependent endothelial effect was evaluated with Ach and NPS concentration- response curves in full rings. In the phytochemical fractionation 9 compounds were identified: (1) Stigmasterol, (2) glyceryl linoleate, (3) 3-O-β-D-glucopyranosyl stigmasterol acid, (4) 3-O-β-D-glucopyranosyl oleanolic acid, (5) 3-O-β-D-glucopyranosyl- (1→ 2) - β-D-glucopyranosyl oleanolic acid, (6) 2 '' - O-xylopyranosyl vitexin, (7) 9,19-cyclolanost-24Z-eno -1β, 3β, 21,26-tetraol-3, (8) 26-di-O-β-glucoside, 9,19-cyclolanost-24Z-eno-3β, 21,26β-triol-3-O-β-gentibioside-26-O-β-glucopyranoside, (9) amino-aminobutyric acid. At in vivo level, all administered treatments demonstrated be effective in blood pressure´s control, and moreover, in functional studies they improved the ACh´s relaxing capacity in the aorta, mesentery and kidney. Histological studies showed a decrease in cardiac and vascular fibrosis, as well as a tendency to reduce ROS´ production caused by hypertension. Compounds 4 and 5 have vasoconstrictor effect related to the activation of extracellular VOCC, and α2 receptors. In addition, both compound 6 and FD-8 have vasodilator effect which relies on the NO / cGMP pathway and muscarinic receptors´ activation.