Antagonismo e inhibición de la comunicación bacteriana en bacterias cultivables aisladas de esponjas del Caribe Colombiano con Biofouling y sin Biofouling

Abstract

The porifers and their symbiotic microbiota have a very close relationship that seeks the establishment and maintenance of holobionte homeostasis. Within this link ecosystem services are transferred that not only benefit the symbiont bacterial community and the sponge body but also the marine ecosystem to which they belong; in this way, the secretion of secondary metabolites, the transformation and provision of essential nutrients and the intermediation in communication events of the porifer and its environment, modulate the composition of the microbiota that intervenes as the establishment of new bacterial species and higher order organisms on the surface of the biofilm where the symbiote microbiota is structured, giving rise to biofouling or epibiosis. The bacterial community, within its complex "social" relationships, regulates both the composition of its populations and the expression of genes that may not be beneficial to the context of the consortium. Thus, the production of virulence factors, bactericidal and bacteriostatic substances and even the production of substances toxic to eukaryotic organisms are regulated from the control of cell proliferation and from the very activation of specific genes. In events such as bacterial Quorum Sensing (QS), cell signaling molecules are used that increase in concentration with population density. These molecules are converted into a signal that activates the expression of genes required by the total population and even by the community to which they belong, allowing bacterial consortia to gain advantage or respond to environmental pressures. Modulating communication events as well as regulating population growth are some of the mechanisms used by the community to maintain the stability of the holobionte. The production of QS-inhibiting molecules and bacterial growth-inhibiting compounds, which are also highly regulated, provides the biological system with tools to prevent some populations from exceeding the production of these substances by disrupting both the community and host integrity. In this research, a pioneer in the field of microbial ecology associated with Colombian Caribbean sponges, we characterized cultivable bacterial communities associated with four marine sponges with biofouling (Aplysina insularis (AiBf) and Desmapsamma anchorata (DaBf)) and without biofouling (Xestospongia muta Xm1 and Xm2) on their surface. We performed the taxonomic determination and comparison of the composition of each community, followed by a qualitative description of the capacity of these isolates to produce and inhibit QS via Acyl Homoserin-Lactone (AHLs) type molecules. We also evaluate the capacity to produce substances that inhibit bacterial growth on isolates from the same consortium. The results showed dominance of the phylum Firmicutes (represented by the genus Bacillus), followed by the phylum Actinobacteria (represented by the genus Micrococcus) and the presence of only four bacterial species belonging to the phylum Proteobacteria, of the genera Pseudomonas, Oceanimonas and Paracoccus. The production of AHL molecules by isolates of the species Pseudomonas oceani and Pseudomonas stutzeri was reported for the first time; and the production of QS inhibitory molecules by 25 bacterial isolates, 13 of them associated to sponges without biofouling and 12 associated to sponges with biofouling. Out of a total of 2148 trials, 138 antagonism events were reported from sponge isolations without epibiosis and 118 events from sponges with epibiosis. The results obtained and the information collected from the literature served to propose the role of certain bacterial species in both ecological niches with and without epibiosis; in addition, a similar number of antagonistic events and inhibition of cellular communication were observed among bacteria belonging to the microbial communities associated with biofouling or the absence of biofouling. This allows us to infer that there are variables within the bacterial community, in addition to those evaluated, that regulate these phenotypes, generating the appropriate conditions for biofouling to establish, develop, or be inhibited.

Los poríferos y su microbiota simbionte poseen una relación muy estrecha que busca el establecimiento y el mantenimiento de la homeostasis del holobionte. Dentro de este vínculo se transfieren servicios ecosistémicos que no sólo benefician a la comunidad bacteriana simbionte y al cuerpo de la esponja sino al ecosistema marino al que pertenecen; de esta manera, la secreción de metabolitos secundarios, la transformación y puesta en disposición de nutrientes esenciales y la intermediación en eventos de comunicación del porífero y su entorno, modulan la composición de la microbiota que interviene como el establecimiento de nuevas especies bacterianas y organismos de orden superior en la superficie de la biopelícula en donde la microbiota simbionte se estructura, dando lugar al biofouling o epibiosis. La comunidad bacteriana dentro de sus relaciones “sociales” complejas, regula tanto la composición de sus poblaciones como la expresión de genes que pueden no ser benéficos para el contexto del consorcio. Así, la producción de factores de virulencia, sustancias bactericidas y bacteriostáticas e incluso la producción de sustancias toxicas para organismos eucariotas se encuentran reguladas desde el control de la proliferación celular y desde la misma activación de genes específicos. En eventos como la comunicación bacteriana tipo Quorum Sensing (QS), se usan moléculas de señalización celular que aumentan en concentración con la densidad poblacional. Estas moléculas, se convierten en una señal que activa la expresión de genes requeridos por la población total e incluso por la comunidad a la que pertenecen, permitiendo que los consorcios bacterianos adquieran ventajas o respondan a presiones del entorno. Modular los eventos de comunicación tanto como regular el crecimiento poblacional son algunos de los mecanismos usados por la comunidad para mantener la estabilidad del holobionte. La producción de moléculas inhibidoras del QS y de compuestos inhibidores del crecimiento bacteriano, que también se encuentran altamente regulados, provee al sistema biológico herramientas para evitar que algunas poblaciones excedan la producción de estas sustancias alterando tanto a la comunidad como la integridad del hospedero. En esta investigación, pionera en el campo de la ecología microbiana asociada a esponjas del caribe colombiano, caracterizamos comunidades bacterianas cultivables asociadas a cuatro esponjas marinas con biofouling (Aplysina insularis (AiBf) y Desmapsamma anchorata (DaBf)) y sin biofouling (Xestospongia muta Xm1 y Xm2) en su superficie. Realizamos la determinación taxonómica y la comparación de la composición de cada comunidad, seguida de una descripción cualitativa de la capacidad que tienen estos aislamientos para producir e inhibir el QS vía moléculas tipo Acil Homoserín Lactonas (AHLs). Así mismo evaluamos la capacidad de producir sustancias inhibidoras del crecimiento bacteriano sobre aislamientos de su mismo consorcio. Los resultados demostraron dominancia por parte del filo Firmicutes (representado por el género Bacillus), seguido por el filo Actinobacteria (representado por el género Micrococcus) y la presencia de apenas cuatro especies bacterianas pertenecientes al filo Proteobacteria, de los géneros Pseudomonas, Oceanimonas y Paracoccus. Se reportó por primera vez la producción de moléculas AHL por parte de aislamientos de las especies Pseudomonas oceani y Pseudomonas stutzeri; y la producción de moléculas inhibidoras del QS por 25 aislamientos bacterianos, 13 de ellos asociados a esponjas sin biofouling y 12 asociados a esponjas con biofouling. De un total de 2148 ensayos se reportaron 138 eventos de antagonismo por parte de aislamientos de esponjas sin epibiosis y 118 eventos de esponjas con epibiosis. Los resultados obtenidos y la información colectada de bibliografía sirvieron para proponer el papel de ciertas especies bacterianas en ambos nichos ecológicos con y sin epibiosis; además se observó un número similar eventos de antagonismo e inhibición de la comunicación celular entre bacterias pertenecientes a las comunidades microbianas asociadas a biofouling o a la ausencia de éste. Esto nos permite inferir que existen variables dentro de la comunidad bacteriana, además de las evaluadas, que regulan estos fenotipos, generando las condiciones adecuadas para que el biofouling se establezca, se desarrolle, o se inhiba.