Nanobioconjugados con base en nanopartículas de sílice y/o fullerenol, Buforina II y la proteína OmpA, con potencial uso como vehículos de penetración celular

Abstract

Diferentes barreras biológicas son generalmente responsables de la limitada liberación de cargos a nivel celular, como estrategia terapéutica. Previamente, se desarrolló una nueva familia de nanobioconjugados con capacidad de penetración celular y de escape a la ruta endosomal, inmovilizando el péptido Buforina II (BUF-II) y la proteína OmpA en nanopartículas (NPs) de magnetita. Aquí, proponemos ampliar este enfoque a nanopartículas de sílice (SNPs) y fullerenol (F) como soportes nanoestructurados para la conjugación de estos potentes agentes de penetración celular, ya que la misma molécula conjugada a diferentes nanotransportadores puede exhibir diferentes interacciones con compartimentos subcelulares. Los nanobioconjugados obtenidos (OmpA-SNPs, BUF-II-PEG12-SNPs, OmpA-F y BUF-II-PEG12-F) se caracterizaron mediante técnicas como espectroscopia infrarroja (FT-IR), UV-vis, Dispersión Dinámica de Luz (DLS), Movilidad Electroforética, Microscopía Electrónica de Barrido (SEM), Microscopía Electrónica de Transmisión (TEM), Análisis termogravimétrico (TGA), Difracción de Rayos X (DRX), y Microscopía confocal para evaluar composición, tamaño, carga, morfología, y confirmar la conjugación de dichos agentes translocantes. Los nanobioconjugados mostraron alta capacidad de internalización en células Vero (ATCC® CCL-81) y THP-1 (ATCC® TIB-202), sin afectar la viabilidad celular, no mostraron efecto hemolítico significativo, así como baja tendencia a inducir agregación plaquetaria. Adicionalmente, mostraron diferente comportamiento en el tráfico intracelular y escape endosomal en estas dos líneas celulares, lo que una vez más demostró el potencial de estos materiales para abordar los desafíos de liberación citoplasmática de fármacos o el desarrollo de terapias para el tratamiento de enfermedades de depósito lisosomal. (Texto tomado de la fuente)

Several biological barriers are generally responsible for the limited delivery of cargoes at the cellular level, as a therapeutic strategy. Previously, a new family of nanobioconjugates capable of cell penetration and endosomal escape was developed by immobilizing the Buforin II (BUF-II) peptide and the OmpA protein on magnetite nanoparticles (NPs). Here, we propose to extend this approach to silica NPs (SNPs) and fullerenol (F) as nanostructured supports for the conjugation of these potent cell-penetrating agents, as the same molecule conjugated to different nanocarriers may exhibit different interactions with subcellular compartments. The obtained nanobioconjugates(OmpA-SNPs, BUF-II-PEG12-SNPs, OmpA-F, and BUF-II-PEG12-F) were characterized via Fourier transform infrared spectroscopy (FT-IR), UV-vis, Dynamic Light Scattering (DLS), Electrophoretic Mobility, Scanning Electron Microscopy (SEM), Transmission Electron Microscopy (TEM), Thermogravimetric analysis (TGA), X-ray diffraction (XRD) techniques, and confocal microscopy was conducted to evaluate size, charge, composition, morphology, and to confirm the conjugation of these translocating agents on the NPs. Nanobioconjugates showed high internalization capacity in Vero cells (ATCC® CCL-81) and THP-1 cells (ATCC® TIB-202), without affecting cell viability, showed no significant hemolytic effect, as well as low propensity to induce platelet aggregation. Additionally, nanobioconjugates showed different intracellular trafficking and endosomal escape behavior in these two cell lines, showing once again the potential of these materials to address the challenges of cytoplasmic drugs delivery or the development of therapeutics for the treatment of lysosomal storage diseases.