Evaluación del efecto antioxidante del aceite esencial de orégano Lippia origanoides Kunth sobre la estabilidad de lípidos y proteínas de la yema de huevo

Abstract

El efecto antioxidante del aceite esencial de orégano (AEO) Lippia origanoides Kunth sobre componentes de la yema de huevo susceptibles a oxidación por periodos largos de almacenamiento ha sido poco estudiado. El objetivo de este trabajo es evaluar la respuesta de la adición de un producto micronizado de aceite esencial de orégano L. origanoides K. (MAEO) sobre la estabilidad en el tiempo de los lípidos y proteínas de la yema de huevo. El estudio se realiza en gallinas ponedoras alimentadas con dietas enriquecidas con ácidos grasos poliinsaturados (AGPI) provenientes de aceite de pescado y con aceite de palma. En las dietas enriquecidas con AGPI se evalúa la inclusión de tres niveles de MAEO y vitamina E libre. Los tratamientos son: dieta + aceite de palma (T1); dieta + AGPI (T2); dieta + AGPI + T3 (T3); dieta + AGPI + 250 ppm de MAEO (T4); dieta + AGPI + 500 ppm de MAEO (T5) y dieta + AGPI + 750 ppm de MAEO (T6); analizados bajo un diseño completo al azar con comparación de medias por contrastes ortogonales. La presencia de AEO en la yema se determina por la cuantificación de timol. La estabilidad oxidativa se evalúa en huevos frescos y después de un periodo de almacenamiento de 60 días, mediante la determinación de la peroxidación lipídica medida a través de la prueba de sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico (TBARS) y el efecto sobre el perfil de ácidos grasos se cuantifica por cromatografía de gases (CG). La respuesta antioxidante a nivel celular se mide por la actividad de las enzimas superóxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT) y glutatión peroxidasa (GSH-Px) extraídas de la yema. El cambio en el perfil de proteínas se observa por electroforesis bidimensional mediante el análisis comparativo de sus imágenes (Melanie 7.0). Los resultados indican presencia de timol en la yema en el rango entre 753 a 1068 ng/g yema seca y perdidas por almacenamiento entre 14.6% a 20.7% de acuerdo al nivel de inclusión. No se presentaron diferencias significativas por efecto de la adición en la dieta de MAEO o Vitamina E sobre lípidos y proteínas de la yema, pero si efectos significativos por la suplementación de AGPI en la dieta; con reducción significativa (P=0.018) en el contenido de AGS de 4.5%. La expresión diferencial de proteínas no presento cambios por la suplementación en la dieta de AGPI, ni la adicción de MAEO o Vitamina E. Los mayores efectos significativos se observaron por el almacenamiento de los huevos; sobre la peroxidación lipídica se encontraron efectos significativos (P0.001), siendo 97,3% más alto para T2 y controlada en un 49% por el T3 y seguido por el T4 en 40%. En general, los resultados no mostraron efectos significativos en el perfil lipídico con excepción del T5 que disminuyó significativamente en 16% en los AGS (P=0.0147) por efecto de T5 y aumentó 22.5% en los AGPI (P=0.0063). Los AGM se incrementaron significativamente (P0,05) en los tratamientos con MAEO T2 (3.2%), T5 (2.3%), T4 (1.3%), y T6 (0.8%). La actividad SOD fue afectada significativamente (P0,05) disminuyendo en T2 (75.7%), T6 (65.9%), T1 (58.7%), T4 (56.7%) y T3 (55.1%). La actividad CAT se incrementó significativamente (P0,05) para T1 (1119%), T6 (185%) y T2 (147%) y disminuyó en T4 (54.7%). La actividad GSH-Px se incrementó significativamente (P0,05) para T2 (113%), T6 (37%), T4 (22%) y disminuyó en T5 (25%). A nivel de expresión de proteínas todos los tratamientos mostraron cambios en el perfil (P0.01), con incremento en el número de puntos de proteína únicos, siendo en su orden los de mayores diferencias T1 (49.4%), T4 (38.5%), T2 (38.1%), T5 (18.6%), T6 (18.6%) y T3 (14.8%). La suplementación con T3 y T4 redujo la peroxidación lipídica en la yema de los huevos enriquecidos AGPI durante el almacenamiento. La suplementación con sustancias antioxidantes retardó la perdida de actividad de la SOD durante el almacenamiento, con respecto a los tratamientos no suplementados. La suplementación con MAEO incrementó la actividad de las enzimas catalasa y glutatión peroxidasa en la yema. La inclusión de MAEO promovió a diferentes niveles la actividad antioxidante intrínseca en la yema y consecuentemente la protegió de la oxidación de lípidos y proteínas durante el almacenamiento del huevo.

Abstract The antioxidant effect of the oregano essential oil Lippia origanoides Kunth (OEO) on egg yolk components susceptible to oxidation for long periods of storage has been little studied. The aim of this study was to evaluate the response of adding a micronized product of oregano essential oil (MOEO) on the stability of lipids and proteins of the egg yolk during storage. The study was conducted in laying hens fed polyunsaturated fatty acid enriched diets (PUFAs) from fish oil and palm oil. In the PUFA enriched diets including three levels of MOEO and free vitamin E is evaluated. The treatments are: diet + palm oil (T1); + PUFA diet (T2); diet + PUFA + T3 (T3); PUFA + diet + 250 ppm MOEO (T4); PUFA + diet + 500 ppm MOEO (T5) and PUFA + diet + 750 ppm MOEO (T6); analyzed under a completely randomized design with comparison of means by orthogonal contrasts. The presence of OEO in yolk is determined by quantifying thymol. Oxidative stability is evaluated in fresh eggs and after a storage period of 60 days, by determining lipid peroxidation as measured by the test of reactive substances to thiobarbituric acid (TBARS) and the effect on the fatty acid profile It were quantified by gas chromatography (GC). Antioxidant response at the cellular level is measured by the activity of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GSH-Px) extracted from the yolk. The change in the protein profile observed by two-dimensional electrophoresis through comparative analysis of their images (Melanie 7.0). The results indicate the presence of thymol in the bud in the range from 753 to 1068 ng/g dry yolk and storage losses between 14.6% to 20.7% according to inclusion level. No significant differences in effect of adding MOEO diet or vitamin E on lipid and yolk proteins were presented, but if significant effects PUFA supplementation in the diet; with significant reduction (P = 0.018) in the SAFA content 4.5%. The differential expression of proteins present changes in dietary supplementation of PUFAs, or addiction MOEO or Vitamin E. The greatest significant effects were observed for egg storage; on lipid peroxidation significant (P 0.001) were found to be 97.3% higher for T2 and 49% controlled by the T3 and T4 followed by 40%. Overall, the results showed no significant effects on the lipid profile than the T5 which decreased significantly by 16% in the SFA (P=0.0147) due to increased 22.5% T5 and in PUFA (P = 0.0063). The MFA were significantly increased (P 0.05) in treatments with MAEO T2 (3.2%), T5 (2.3%), T4 (1.3%) and T6 (0.8%). SOD activity was affected significantly (P 0.05) decrease in T2 (75.7%), T6 (65.9%), T1 (58.7%), T4 (56.7%) and T3 (55.1%). CAT activity was significantly increased (P 0.05) for T1 (1119%), T6 (185%) and T2 (147%) and decreased T4 (54.7%). GSH-Px activity was significantly increased (P 0.05) for T2 (113%), T6 (37%), T4 (22%) and decreased in T5 (25%). At the level of protein expression all treatments showed changes in the profile (P 0.01), an increase in the number of protein spots unique, being in the order the greater differences T1 (49.4%), T4 (38.5%), T2 (38.1%), T5 (18.6%), T6 (18.6%) and T3 (14.8%). Supplementation with T3 and T4 decreased lipid peroxidation in the egg yolk enriched PUFA during storage. Supplementation with antioxidants delayed loss SOD activity during storage, compared to unsupplemented treatments. MOEO supplementation increased the activity of enzymes catalase and glutathione peroxidase in the bud. The inclusion of different levels MOEO promoted intrinsic antioxidant activity in the yolk and consequently protected from oxidation of lipids and proteins during egg storage.