Evaluación in vitro del efecto antiviral de compuestos derivados de plantas de la Región Caribe Colombiana sobre la infección por Virus Dengue y Virus Chikungunya

Abstract

The transmission of Dengue virus (DENV) and Chikungunya virus (CHIKV) has increased worldwide, due in part to the lack of a specific antiviral treatment. For this reason, the search for compounds with antiviral potential, either as licensed drugs or in natural products, is a research priority. The objective of this study was to identify some of the compounds that are present in Mammea americana (M. americana) and Tabernaemontana cymosa (T. cymosa) plants and, subsequently, to evaluate their cytotoxicity in VERO cells and their potential antiviral effects on DENV and CHIKV infections in those same cells. Dry ethanolic extracts of M. americana and T. cymosa seeds were subjected to open column chromatographic fractionation, leading to the identification of four compounds (with two coumarins, namely lupeol acetate, and voacangine). The cytotoxicity of each compound was subsequently assessed by the MTT method (at concentrations from 400 to 6.25 μg/mL). Pre- and post-treatment antiviral assays were performed at non-toxic concentrations; the resulting DENV inhibition was evaluated by Real-Time PCR, and the CHIKV inhibition was tested by the plating method. The results were analyzed by means of statistical analysis. The compounds showed low toxicity at concentrations ≤ 200 μg/mL. The compounds coumarin A and coumarin B, which are derived from the M. americana plant, significantly inhibited infection with both viruses during the implementation of the two experimental strategies employed here (posttreatment with inhibition percentages greater than 50%, p < 0.01; and pre-treatment with percentages of inhibition greater than 40%, p < 0.01). However, the lupeol acetate and voacangine compounds, which were derived from the T. cymosa plant, only significantly inhibited the DENV infection during the post-treatment strategy (at inhibition percentages greater than 70%, p < 0.01). In vitro, the coumarins are capable of inhibiting infection by DENV and CHIKV (with inhibition percentages above 50% in different experimental strategies), which could indicate that these two compounds are potential antivirals for treating Dengue and Chikungunya fever. Additionally, lupeol acetate and voacangine efficiently inhibit infection with DENV, also turning them into promising antivirals for Dengue fever.

La transmisión del DENV y del CHIKV se ha incrementado mundialmente, debido en parte a la falta de un tratamiento antiviral específico. Por esta razón la búsqueda de compuestos con potencial antiviral es una prioridad de investigación. En el presente trabajo, se evaluó el efecto antiviral de cuatro compuestos extraídos de semillas de Mammea americana (Cumarina A y Cumarina B) y Tabernaemontana cymosa (Acetato de Lupeol y Voacangina) sobre la infección por DENV y CHIKV en células VERO. Se evaluó la citotoxicidad de cada compuesto por el método MTT (concentraciones desde 400 hasta 6.25μg/mL). Con concentraciones no tóxicas se realizaron los ensayos antivirales con dos estrategias experimentales (Pre y Post-Tratamiento) y se evaluó el potencial antiviral de cada una sobre la infección por CHIKV (método de plaqueo) o DENV (q-PCR). Los resultados fueron analizados por medio de análisis estadístico (ANOVA-DMS o t-Student). En el análisis los compuestos mostraron baja toxicidad en concentraciones ≤200μg/mL. Los compuestos Cumarina A y Cumarina B, inhibieron de manera significativa la infección por ambos virus en las dos estrategias experimentales empleadas (Post-Tratamiento con porcentajes de inhibición (PI) mayores al 50%, p<0.01; y Pre-Tratamiento con PI mayores al 40%, p<0.01). Por otro lado, las compuestos Acetato de Lupeol y Voacangina, solo inhibieron de manera significativa la infección por DENV en la estrategia post-tratamiento con PI mayores al 70%, p<0.01. Se concluye que in vitro, las Cumarinas son capaces de inhibir la infección del DENV y el CHIKV (con porcentajes de inhibición superiores al 50% en diferentes estrategias experimentales) lo que podría convertir a estos dos compuestos, en potenciales antivirales para el tratamiento del Dengue y el Chikungunya. Adicionalmente el Acetato de Lupeol y la Voacangina inhiben eficientemente la infección DENV, convirtiéndolos también en promisorios antivirales para el Dengue.