Desarrollo de un método de análisis por cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC-DAD) para la caracterización de especies de la familia Asteraceae

Abstract

In Colombia there are more than 27,000 species of plants and most of them, their composition or biological activity are unknown, because taxonomic identification is not always easy, since it requires a botanical professional. Some species of the genera Chromolaena, Gnaphalium, Achyrocline and Gamochaeta, of the family Asteraceae (vira-viras); They are recognized in Colombia for their therapeutic applications in various pathologies, so some research conducted in recent years, including of the research group PRONAUDCA, of the University of Applied and Environmental Sciences, have focused on this family and identifies flavonoids as some of the potentially active compounds. This metabolites, due to this, have become one of the most studied groups of molecules, both in vivo and in vitro, finding a high antioxidant, anti-inflammatory, antimicrobial, cardioprotective and antineoplastic activity. In accordance with the above, the present work was based on the development of an analytical method by high performance liquid chromatography (HPLC-DAD) for the characterization of species belonging to this family, which allows to separate and identify the composition of plant extracts, creating fingerprints that become a tool that allows faster identification of these species The development of the method consisted of a gradient with a flow of 1.1 ml/min; a mobile phase composed of methanol- acetic acid (2%) in water, at different concentrations; a C18 reverse phase column and a LaChrom Elite liquid chromatograph coupled to a UV-VIS UV detector. Thanks to this, the separation of 12 flavonoids present in the family of asteraceae was achieved and characterized. In addition, an extract of the species Achyrocline Saturaioide was analized, finding 4 of the flavonoids worked in this investigation, which were identified thanks to the comparison in the retention times and the absorbance spectra obtained by using the diode array detector. Therefore, it is recommended to carry out more tests with these extracts in future research to advance in the creation of a fingerprint library for the characterization of these species through the presence of reproducible patterns. Additionally, the validation of the method was advanced with the realization of the linearity parameter

En Colombia existen más de 27.000 especies de plantas y de la mayoría no se conoce su composición o actividad biológica, debido que la identificación taxonómica no siempre es fácil. Algunas especies de los géneros Chromolaena, Gnaphalium, Achyrocline y Gamochaeta, de la familia Asteraceae (vira-viras); son reconocidas debido a sus aplicaciones terapéuticas en diversas patologías, por lo cual algunas investigaciones realizadas en los últimos años, incluso en el grupo de investigación PRONAUDCA, de la Universidad De Ciencias Aplicadas y Ambientales, se han centrado en esta familia identificando a los flavonoides como algunas de las moléculas potencialmente activas, debido a esto se han convertido en uno de los grupos de moléculas más estudiados, tanto in vivo como in vitro, encontrando alta actividad antioxidante, antiinflamatoria, antimicrobiana, cardioprotectora y antineoplásica. De acuerdo a lo anterior el presente trabajo se fundamentó en el desarrollo de un método analítico por cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC- DAD) para la caracterización de especies pertenecientes a esta familia, que permita separar e identificar la composición de extractos vegetales, creando huellas dactilares que se conviertan en una herramienta que permita la identificación más rápida de estas especies. El desarrollo del método consistió en un gradiente con un flujo de 1,1mL/min; una fase móvil compuesta por metanol- ácido acético (2%) en agua, a diferentes concentraciones, una columna fase reversa C18 y un cromatógrafo liquido LaChrom Elite acoplado a un detector UV-VIS con arreglo de diodos Gracias a esto se logró la separación de 12 flavonoides presentes en la familia asteraceae. Adicionalmente se corrió un extracto de la especie Achyrocline Saturaioide encontrando 4 de los flavonoides trabajados en esta investigación, los cuales se identificaron gracias a la comparación en tiempos de retención y los espectros de absorbancia obtenidos mediante el uso del detector de arreglo de diodos. Con lo que se recomienda realizar más ensayos con estos extractos en futuras investigaciones para avanzar en la creación de una biblioteca de huellas dactilares para la caracterización de estas especies mediante la presencia de patrones reproducibles. Adicionalmente se avanzó en la validación del método con la realización del parámetro de linealidad.