Evaluación de la Citotoxicidad de Nanoparticulas de Oro Conjugadas al Peptido CLPFFD-NH2

Abstract

La nanotecnología, en la biomedicina, trabaja desarrollando herramientas, tanto de diagnóstico, como estrategias terapéuticas, menos invasivas y más eficientes que las actualmente en uso. Entre estas herramientas, se encuentran el uso de las nanopartículas metálicas (NPM), las cuales, siendo tan pequeñas tienen la propiedad de poder difundir a través de barreras biológicas, siendo capaces de llegar al sitio de interés terapéutico. Las nanopartículas de oro (AuNP) poseen potenciales aplicaciones en el campo de la biomedicina, siendo una de ellas el diagnóstico y la terapia de la enfermedad de Alzheimer (EA). Recientemente, en nuestro laboratorio se demostró que es posible producir la desagregación de agregados tóxicos (AT) de la proteína β-amiloide (Aβ) involucrada en la EA mediante el uso de AuNP y la aplicación de campos magnéticos oscilantes. Para unir las AuNP a los AT de Aβ, las mismas se conjugaron al péptido CLPFFD-NH2, que presenta afinidad por Aβ, obteniendo los conjugados AuNP-CLPFFD-NH2 (AuNP-Pep) . En este trabajo de memoria se evaluó su neurotoxicidad. Para ello se realizaron ensayos de viabilidad, frente a cultivos de neuronas hipocampales extraídas de embriones de rata (E18) y Neuroblastoma SH-SY5Y. Para el caso de las AuNP se encontró una leve disminución de la viabilidad respecto de los controles. Contrariamente, para AuNP-Pep, existe un aumento de la viabilidad celular que implica neuroprotección. Asimismo se evaluaron los efectos de los tratamientos en los mecanismos de muerte celular. Por otra parte, se determinaron los niveles de ROS producidos por las AuNP y las AuNP-Pep observándose que estas últimas presentan a tiempos tempranos de incubación un aumento de estas especies. También se estudió la producción de proteínas, en cultivos de neuronas, y se encontró un aumento en ciertas proteínas que, darían cuenta, de un efecto de “preacondicionamiento”, que contribuye a activar mecanismos de defensa que convierten a las neuronas en más resistentes

The nanotecnology, in biomedicine, works in pursuit to develop diagnosis as therapeutic tools, with strategies less invasive and more efficient than nowadays in use. We can find the use of the metallic nanoparticles (MNP), which, being so small have the property of being able to spread across biological barriers, being capable of coming to the place of therapeutic interest. The gold nanoparticles (AuNP) possess potential applications in the field of biomedicine, being one of them, the diagnosis and the therapy of Alzheimer's disease (AD). Recently, in our laboratory there was demonstrated that it is possible to produce the disaggregation of toxic attachés (TA) of the protein β-amyloid (Aβ) involved in the AD using AuNP and the application of magnetic oscillating fields. To join the AuNP to this TA of Aβ, the same ones were conjugated to the peptide CLPFFD-NH2, which presents affinity for Aβ. Obtaining the conjugate AuNP-CLPFFD-NH2 (AuNP-Pep). In this report, there neurotoxicity was evaluated. For this assays of viability were realized, cultures of hippocampal neurons extracted from embryos of mice (E18) and Neuroblastome SH-SY5Y. For the case of the AuNP a slight decrease of the viability was reported, respect of the controls. Opposited of that, for AuNP-Pep, there exists an increase of the cellular viability that it implies neuroprotección. Likewise the effects of this treatments were evaluated in the mechanisms of cellular death. On the other hand, ROS levels produced by the AuNP and the AuNP-Pep were determined, being observed an increase of these species at early times of incubation Also the synthesis of proteins, in cultures of neurons, was studied and one found an increase in certain proteins that, they would realize, of an effect of "preaconditioning", that helps to activate mechanisms of defence that it will make the neurons in more resistant to injurys