Tesis Doctorado
Diferentes vías de señalización median la respuesta a tnf-alfa de la actividad ciliar de oviducto
Autor
Villalón-B, Manuel
Pontificia Universidad Católica de Chile
Institución
Resumen
El oviducto es un órgano esencial en el desarrollo preimplantacional de los embriones y en el paso de éstos al útero para la implantación. La pared de esteórgano se encuentra formada principalmente por células epiteliales ciliadas y musculares, ambos efectores celulares responsables del transporte oviductal (TO) que está regulado por múltiples señales químicas producidas por el ovario, losgametos y embriones y por el epitelio oviductal. Alguna de las señales producidas por el epitelio son el ATP, prostaglandinas (PG), óxido nítrico (NO). Estas señales,entre otras cosas regulan la frecuencia de batido ciliar (FBC), de la que a su vez, depende el TO. Se ha planteado que el factor de necrosis tumoral-a (TNF-?) puede regular la fisiología del transporte oviductal. TNF-? es una citoquina pleiotrópica que participa en una amplia gama de efectos biológicos: la muertecelular por necrosis y apoptosis, proliferación celular, regulación de la respuesta inmune e inflamación. En el oviducto se le asocia tanto a procesos infecciosos(patológicos) como a la regulación de la síntesis de sustancias que regulan el TO (fisiológico). Concentraciones del orden picomolar están presentes en el fluido oviductal en condiciones fisiológicas, y se ha descrito la presencia constitutiva delos receptores para TNF-? en varios modelos animales. En otros sistemas, los efectos de TNF-? están asociados a la producción de ácido araquidónico (AA)/PG y NO. Sin embargo, en el oviducto, no se ha estudiado el efecto de TNF-? sobre la actividad ciliar y el trasporte oviductal, ni la participación de PG y NO en larespuesta a diferentes concentraciones de TNF-?. Para establecer el efecto de bajas y altas concentraciones de TNF-? sobre la FBC y la participación de las vías del AA/PG y de la NO sintasa (NOS)/NO en la respuesta a TNF-?, medimos los cambios en la FBC en respuesta a 1 ng/ml TNF-? (baja concentración) y 50 o 100ng/ml TNF-? (altas concentraciones), en presencia de inhibidores de la fosfolipasaA2 citosólica (cPLA2), ciclooxigenasa (COX) y de la NOS, en cultivo celular de epitelio ciliada de oviducto de rata. Nuestros resultados muestran que TNF-? tiene un efecto monofásico sobre la FBC; la respuesta a una baja concentración de TNFa está mediada por la activación de la vía AA-PG-proteína kinasa A (PKA),mientras que altas concentraciones de TNF-? activan la vía de la NOS y la síntesis de NO. Adicionalmente, se estableció que 100 ng/ml de TNF-? previene el aumento de la FBC inducido por ATP, al agregar ambas sustancias de manera simultánea.No se observó efectos de TNF-? (1 o 100 ng/ml) sobre la propagación de ondas de calcio, ni cambios en los niveles de Ca2+ libre intracelular. En ensayos funcionales, se estableció que 10 ?g/?l de TNF-? acelera el movimiento de microesferas en el segmento ístmico del oviducto, sin embargo, no se observó cambios en el transporte de embriones, en respuesta a esta misma concentración de citoquina.Nuestros resultados establecen que TNF-? activa de manera diferencial y concentración-dependiente las vías del AA/PG y del NO, lo que sugiere un rol fisiológico y fisiopatológico de esta citoquina en el proceso reproductivo deloviducto.