Tesis Doctorado
Generación de un ratón transgénico condiciónal, que sobreexpresa p35, activador neuroespecífico de la cdk5, en el sistema nervióso central aspectos celulares y moleculares en neurodegeneración
Autor
González-Billault, Christian
Macioni-Baraona, Ricardo
Universidad de Chile
Institución
Resumen
La enfermedad de Alzheimer (EA) es un desorden neurodegenerativo que se caracteriza
por dos tipos de agregados proteicos: extracelulares (placas seniles) e intracelulares
(ovillos neurofibrilares, ONF). Los ONF están formados principalmente por la proteína
tau hiperforforilada.¡ Varias quinasas pueden fosforilar tau, incluyendo Gsk3¡3, MAP
quinasa, la proteína quinas a A y la quinasa dependiente de cíclina 5 (cdk5). Se ha
postulado que la desregulación de cdk5 sería un evento determinante en la
hiperfosforilación de tau en la EA. cdk5 se asocia con p35, expresado
predominantemente en neuronas, por lo que la mayor actividad de cdk5 está concentrada
en sistema nervioso. La sobreexpresión de p25 (fragmento proteolítico de p35) en varios
modelos de ratones transgénicos produce un aumento en la actividad de cdk5 que
conlleva hiperfosforilacíón de tau, muerte neuronal y astrogliosis. Con estas evidencias
de la participación del complejo cdk5/p35 en procesos de neurodegeneración como la
EA, se generó un modelo de ratón transgénico condicional que sobreexpresa la proteína
p35 en cerebro de manera regulable con el sistema de expresión génica dependiente de
tetraciclina (Tet). Para ello se generó el vector BifetO-P35IEGFP y se analizó la
expresión y la regulación de los trangenes en células NzA-tTA. Posteriormente, se
obtuvieron 4 líneas de animales transgénicos fundadores (L3, L5, L 7 Y L9) que
transportan el transgén. Estos animales fueron cruzados con animales que sobreexpresan
tTA en el sistema nervioso central obteniendose animales dobles transgénicos (B~fetOp35IEGFP
y tTA). Mediantelt'estem blot se determinó que no hubo sobre expresión de
p35 ni expresión de EGFP en todos los animales dobles transgénicos analizados.
Posiblemente debido a una inactivación y un posterior silenciamiento de los transgenes.
Finalmente, cultivos de neuronas hipocampales de ratón fueron transfectados con
BiÍetO-p35IEGFP y tTA en presencia de A¡3¡-42,(y mediante inrnunofluorescencia contra
caspasa 3 activada (marcador de apoptósis) se determinó que la mayoría de las neuronas
transfectadas eran positivas para caspasa 3 activada. Además, se determinó que en
neuronas hipocampales la reversión de la sobre expresión de p35 con tetraciclina revirtió
en parte la muerte por apoptósis. Estos resultados demuestran la participación del
complejo cdk5/p35 y un posible sinergismo con la vía amieloidogénica en la inducción
de apoptósis en neuronas hipocampales.