Facilitación de la liberación de dopamina en el núcleo accumbens de ratas tratadas en forma repetida con el agonista opióide kappa u-69593.

Abstract

Las propiedades reforzadoras de las drogas de abuso, como la cocaína, son disminuidas por la co-administración de agonistas de los receptores opioide kappa. Este efecto está relacionado con la capacidad de inhibir la liberación de dopamina en el núcleo accumbens en el sistema nervioso central, cuando estos agonistas se administran en forma aguda. En esta tesis se investigó el efecto in vivo de la administración repetida de un agonista de los receptores opioide kappa sobre la liberación de dopamina en el núcleo accumbens de la rata. El agonista selectivo de los receptores opioide kappa, U-69593, fue administrado a ratas una vez al día durante 4 días consecutivos. Mediante estudios de microdiálisis cerebral se cuantificaron los niveles extracelulares de dopamina basales y estimulados por K, un día después de la última inyección de U-69593. Los resultados muestran que la pre-exposición repetida a U-69593 no afecta los niveles basales de dopamina, pero aumenta significativamente la liberación de dopamina estimulada por K. En concordancia a lo anterior, la actividad locomotora estimulada por anfetamina también aumentó significativamente en las ratas pre-expuestas a U-69593. El agonista de los receptores dopaminérgicos D2, quinpirole, perftindido a través de la cánula de microdiálisis, disminuyó en un 50% los niveles extracelulares de dopamina tanto basales como estimulados, en las ratas controles. Sin embargo, quinpirole no disminuyó los niveles extracelulares de dopamiria, ni basales ni estimulados por K, en las ratas preexpuestas a U-69593. Además, la pre-exposición repetida a U-69593 no cambia la expresión de la tirosina hidroxilasa ni del transportador de dopamina en el área tegmental ventral. Estos resultados muestran que la activación repetida de los receptores opioides kappa produce la facilitación de la liberación de dopamina estimulada por K en el núcleo accumbens, un efecto mediado por una disminución en la función de los receptores dopaminérgicos D2. Esta facilitación de la neurotransmisión dopaminérgica mesolímbica esta acompañada por una sensibilización de la actividad locomotora inducida por anfetamina. Nurri es un miembro huérfano de la superfamilia de los receptores nucleares, esencial para el desarrollo y mantención de las neuronas dopaminérgicas mesencefálicas. Varios estudios en cultivos celulares sugieren que Nurri regula la expresión de genes dopaminérgicos, tales como la tirosina hidroxilasa y el transportador de dopamina. En esta tesis se estudió si Nurri regula la expresión del receptores opioide kappa, otro gen expresado en neuronas dopaminérgicas mesencefálicas e implicado en la homeostasis de la dopamina. Usando como modelo la línea celular PC-12, se demostró que Nurri incrementa la actividad de un gen reportero controlado por 1 Kb del promotor del receptor opioide kappa de ratón. Es interesante hacer notar que la regulación transcripcional sobre el promotor del receptor opioide kappa resultó ser independiente del dominio de unión a ADN de Nurri. Estos resultados sugieren que Nurri podría actuar como un co-activador transcripcional, de manera similar al control que ejerce sobre el promotor del transportador de dopamina. En este trabajo se diseñaron y generaron 3 ribozimas del tipo "cabeza de martillo, específicas para disminuir la expresión del ARNm de Nurri. Las tres ribozimas generadas cortan eficientemente el RNAm de Nurri in vitro. Estas ribozimas son potenciales herramientas poderosas para el estudio ¡ti vivo del efecto de una disminución de Nurri sobre la expresión de sus genes blanco en neuronas dopaminérgicas mesencefálicas.