| dc.description.abstract | Las giberelinas son fitohormonas diterpénicas que controlan diversos aspectos del
desarrollo vegetal y que están presentes en algunos hongos. En Vilís vini/era el ácido
gibcrélico (GA3 ) podría ser la giberelina responsable del crecimiento de los frutos puesto que
éste se induce eficientemente mediante la aplicación externa de GA 3 (proveniente del hongo
Gibberellu fujikuroi). Existe escasa información, sin embargo, acerca de las giberelinas
endógenas y de su metabolismo en Vilis vinífera, lo que constituye el objetivo del trabajo aquí
descrito. Las principales giberelinas requeridas para el desarrollo de estos objetivos fueron
aisladas desde cultivos de Gibberellafujikuroi y caracterizadas. Se implementó una metódica
cromatográfica simple y eficiente, para obtener las giberelinas lactónicas GA 3 , GA4 , GA7 y
GA9 en forma de los metí¡ ésteres. Se obtuvieron además como productos menores la lactona
GA 1 y las giberelinas de 20 carbonos GA21 y GA25 junto con algunos derivados del en!-
kaureno (70-0H-kaurenolido, 70,1 8-diOH-kaurenolido y ácido eni-kaurenoico), los que
fueron identificados por CG/EM. Se desarrolló la caracterización estructural completa para las
giberelinas lactónicas GA 3 , GA4 y GA7, particularmente la asignación de las señales de RMN
de protones.
Las giberelinas y derivados del ent-kaureno provenientes del hongo, se utilizaron como
patrones cromatográficos en la identificación de las giberelinas endógenas de los frutos de
Vilis vinífera y como posibles precursores metabólicos.
Se investigó el contenido de giberelinas endógenas, en la primera fase del crecimiento
de los frutos de la variedad semillada Ribier de Vitis vinífera, 20 a 30 días después de la
antesis. Los frutos se extrajeron y se obtuvieron 3 fracciones que contienen respectivamente:
giberelinas libres, giberelinas conjugadas y los precursores de giberelinas, derivados del cnt-kaureno. En la fracción de giberelinas libres se encontró ácido giberélico, giberelina 1(2)
19,10-y-lactónica-3,13-hidroxilada, la que se identificó por su tiempo de retención y patrón de
fragmentación en CG/EM por comparación con el ácido giberélico aislado de Gihherella
fui íkuroi. La asignación estructural completa de los fragmentos característicos obtenidos en
cspcctromctría de masas para esta giberelina, completó su identificación. Los niveles de GA1
detectados, fueron del orden de 92,8 ng por g de tejido fresco extraído. No se detectaron otras
giberelinas libres, lo que sugiere que las concentraciones de los posibles intermediarios
estarían bajo el límite de detección del método empleado.
En la fracción de giberelinas conjugadas, se detectaron 8 glicósidos de giberelinas.
Estos difieren en los tiempos de retención en CG y se identificaron como tales por su espectro
de masas, el que contiene fragmentos de la porción giberelina (mlz 103, 116, 129, 147,193,
207, etc), de la porción glucosídica (mlz 191, 204, 217, 271, 289, 305, 319 y 361) y
fragmentos que contienen parte de ambas porciones (mlz 450, 378, 349, etc). Aunque esta
información estableció que se trata de glicósidos de giberelinas, no pudieron asociarse a
giberelinas específicas debido a que el patrón de fragmentación de la porción diterpénica no se
obtiene completo en el rango de barrido del instrumento. A pesar de esta limitación se pudo
establecer que las giberelinas glicosiladas son hidroxiladas (por los fragmentos 103, 116, 129,
147, 193, 207, etc) conteniendo en la mayor parte de los casos grupos hidroxilo vecinales que
podrían estar relacionados con el catabolismo del ácido giberélico (GA 3 ). Tres de los
glicósidos detectados presentan iones fragmento característicos del ácido giberélico. El nivel
de glicósidos de giberelinas en los frutos fue mayor que el de GA3.
El precursor temprano de la síntesis de giberelinas, ácido eni-kaurenoico administrado
a los frutos en la primera fase del crecimiento, se metabolizó en una baja proporción. Después de 2 días, se detectaron como productos en la fracción de giberelinas libres dos giberelinas
que presentan los iones fragmento de giberelinas no hidroxiladas, las que no pudieron ser
identificadas. Se detectaron además trazas de GA 3 , probablemente endógeno y se recuperó un
14% del ácido en¡-kaurenoico no metabolizado. En general las giberelinas y derivados del en!-
kaureno se recuperaron con un bajo rendimiento desde los frutos posiblemente debido a su
interacción y precipitación con fenoles y taninos.
Utilizando 14C-GAl2 como precursor se evidenció por CLAR metabolización a
giberelinas más polares. La mayor parte de los productos presentan tiempos de retención de
giherelinas hidroxiladas o de compuestos más polares que éstas, que podrían corresponder a
glicósidos. También se detectaron, en pequeña proporción, productos con el tiempo de
retención de giberelinas no hidroxiladas. Las lactonas GA4 y GA7 no fueron metabolizadas
por los frutos.
Los resultados obtenidos indican que los frutos de la variedad Ribier de Vítís vinfera
están activos en la biosíntesis de giberelinas durante la primera fase del crecimiento y que se
acumula en este período la giberelina lactónica A' 2' -3,13-hidroxilada, GA3 , la que se detectó
también en forma de glicósido. Esto, junto con el efecto de inducción del crecimiento de los
frutos por GA3 exógeno, sugiere que GA3 podría ser la giberelina bioactiva o una de las
giberelinas bioactivas en este sistema vegetal. La mayor parte de las giberelinas se encuentran,
sin embargo, como glicósidos en los frutos inmaduros. Los glicósidos podrían ser productos
del catabolismo o bien actuarían como reservorio desde el que podrían liberarse giberelinas
bioactivas o sus precursores en etapas posteriores del desarrollo. | |
