Señales de tráfico basolateral basadas en tirosina: ensamblaje del complejo ap1 de reconocimiento y nueva función en secreción.

Abstract

Los tejidos epiteliales mantienen una barrera de permeabilidad entre el organismo y su entorno debido a que las células que los conforman establecen uniones estrechas entre ellas. Estas células poseen su superficie dividida en los polos apical y basolateral al que destinan selectivamente proteínas. En la ruta secretoria, las proteínas son transportadas hasta el TGN, donde son segregadas y empacadas en vesículas hacia la MP apical o basolateral. Las proteínas de membrana basolaterales presentan señales de destinación peptídicas presentes siempre en sus dominios citosólicos, la mayoría basadas en el aminoácido tirosina. La familia de complejos adaptadores AP (API-4) forman parte de la maquinaria citosólica que reconoce estas señales y acoplan a las proteínas carga a los sistemas formadores de vesículas. Estos complejos heteroterámeros, que funcionarían en distintas rutas de transporte, están compuestos por dos subunidades grandes (γ/α/δ/ε y β1-4), una mediana (μ1 -4) y una pequeña (σ1-4), siendo la subunidad pt la que posee un bolsillo de reconocimiento para señales tirosina. El complejo adaptador AP IB. de expresión epitelial, segrega un conjunto de proteínas hacia la superficie basolateral. Hemos descrito un anticuerpo anti-μ 1 Bn con el cual hemos demostrado que AP1B funciona en endosomas de reciclaje segregando proteínas hacia la superficie basolateral, en la ruta biosintética (p.e VSVG) o en la ruta de reciclaje (p.e. LDLR). ¿Cómo son segregadas las proteínas de secreción basolateral? Estas proteínas solubles no poseen dominios citosólicos que presenten señales que puedan ser reconocidas por los adaptadores citosólicos. Se ha especulado que podrían utilizar un recepto r-segregado r transmembrana, sin embargo, no existe evidencia que avale su existencia. En esta tesis hemos postulado que si el receptor-segregador existe posiblemente utilice la maquinaria de adaptadores citosólicos que reconoce tirosina, debido a que éstas son las señales más frecuentemente encontradas. Mediante una estrategia que combina cultivos epiteliales polarizados en filtros de policarbonato con experimentos de pulso y caza pudimos evaluar la secreción biosintética de la proteína de transmembrana E-caderina y proteínas de secreción basolateral (fibronectina y otras). La fibronectina fue secretada por un mecanismo activo que depende de microtúbulos, distinto del que utiliza la proteína de transmembrana, E-caderina.