masterThesis
Purificação e caracterização de proteases do Saramunete, Peseudupeneus maculatus, (Teleostei Mullidae)
Registro en:
Acacia Gomes de Souza, Ana; Bezerra de Carvalho Junior, Luiz. Purificação e caracterização de proteases do Saramunete, Peseudupeneus maculatus, (Teleostei Mullidae). 2004. Dissertação (Mestrado). Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, 2004.
Autor
SOUZA, Ana Acacia Gomes de
Institución
Resumen
Uma enzima do tipo tripsina foi parcialmente purificada do intestino e cecos
pilóricos do saramunete (Pseudupeneus maculatus). Para isto foi utilizado um
método simples de quatro etapas (tratamento térmico, precipitação por sulfato
de amônio, diálise e cromatografia em gel de filtração Sephadex G-75). As
enzimas do intestino e cecos pilóricos tiveram os coeficientes de purificação de
96 vezes e 57.7 vezes purificadas, respectivamente, de acordo com esses
procedimentos, e os rendimentos foram de 68.1% e 26.1%, respectivamente.
As proteínas coletadas da cromatografia em gel de filtração Sephadex G-75
apresentaram uma única banda em SDS-PAGE, com um peso molecular de
24.5 kDa e foram hábeis para hidrolisar caseína. Ambas as enzimas
apresentaram um pH ótimo idêntico de 9.0 e temperatura ótima de 55oC.
Perderam metade de sua atividade quando incubadas nesta temperatura por
30 min. O Km para as enzimas do intestino e dos cecos pilóricos foram 3.23 ±
0.04 mM (n =7) e 1.86 ± 0.26 mM (n = 8), respectivamente. Esta diferença
estatisticamente significativa no Km
foi a única discrepância entre as enzimas
em estudo. Finalmente, essas atividades enzimáticas foram inibidas pelos
seguintes íons em ordem decrescente: Al3+>Zn2+>Hg2+=Cu2+> Cd2+. Os efeitos
do Ca2+, Mg2+
, Mn2+, Ba2+, K+1, Li+1 e Co2+ foram estatisticamente significantes
entre as enzimas do intestino e cecos pilóricos