Orientador: Ana Carolina Migliorini FigueiraDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: O hormônio tireoidiano regula diversas funções do sistema endócrino por meio da interação deste com seu receptor (receptor nuclear de hormônio tireoidiano ¿ TR). Na presença de um ligante esse receptor sofre uma mudança conformacional que permite sua interação com proteínas coativadoras, como a GRIP (proteína de interação com o receptor de glucocorticóide - glucocorticoid receptor interacting protein). A associação do TR com coativadores auxilia na abertura da estrutura da cromatina, através do recrutamento de acetilases de histonas, resultando na ativação da transcrição de diversos genes, principalmente dos genes ligados à produção de proteínas que regulam o metabolismo basal. Este projeto teve como principal objetivo estudar a formação e a caracterização do complexo receptor nuclear com coativador para mapear possíveis interfaces de interação adicionais e entender melhor sua formação. Para isso foram realizados ensaios que possibilitaram avaliar a estequiometria dos complexos, a afinidade entre essas proteínas e também a influência dos ligantes desses receptores na formação dos complexos. Foram desenvolvidos os ensaios de purificação das proteínas e montagem dos complexos (por ensaios de pull down ou coexpressão). Ensaios de anisotropia de fluorescência possibilitaram a verificação da afinidade entre receptroes nucleares (NRs) e a GRIP e do mecanismo de ação do ligante do RXR (Retinoid X Receptor) (ácido 9-cis retinóico ¿ 9C) no complexo TR:RXR:GRIP. Além destes, também foram realizados outros experimentos de caracterização biofísica para avaliar a qualidade das amostras e a estabilidade da estrutura secundária das proteínas e complexos. Como principais resultados, obtivemos dados sobre a afinidade dos complexos e sua estabilidade, que nos mostraram que a presença de construções mais completas são importantes na sua estabilização. Através da anisotropia de fluorescência observamos que o 9C atua no complexo, auxiliando no desligando correpressores. É importante mencionar que este trabalho resultou no maior detalhamento do mecanismo de ativação do TR o que poderá fornecer subsídios, por exemplo, para o planejamento de fármacosAbstract: The thyroid hormone regulates many functions of the endocrine system through the interaction with its receptor (nuclear receptor thyroid hormone - TR). In the presence of its ligand, the receptor undergoes a conformational change that allows the interaction with coactivator proteins, asGRIP. The combination of TR with coactivators assists in opening the chromatin structure via the recruitment of histone acetylases. These results in the activation of transcription of many genes, particularly genes linked to the expression of proteins that regulate the basal metabolism. This project aimed to study the formation and characterization of nuclear receptor with coactivator complex to map possible additional interaction interfaces and to better understand their formation. We performed assays which enabled us to evaluate the stoichiometry of the complex, the affinity between these proteins; and, also, the activity of the ligands of these receptors. We developed protocols for protein purification and formation of complex (as pull down-like and coexpression). Fluorescence anisotropy assays made possible to verify the affinity between TRs and GRIP, and also to study the mechanism of action of RXR ligand (9C) in the complex TR: RXR: GRIP. In addition, other biophysical characterization experiments were made to evaluate the quality of the samples and the stability of the secondary structure of proteins and complexes. The main results gave information of the affinity of the complexes and their stability, which showed that the presence of more complete constructions of these receptors are important in their stabilization. By fluorescence anisotropy we observed that the 9C operates in the complex helping to dissociate correpressores. It is worth to highlight that this research helped to get more detail about TR¿s mechanism of action, which could be useful, for example, for drug designMestradoFármacos, Medicamentos e Insumos para SaúdeMestra em Biociências e Tecnologia de Produtos Bioativos2013265074FAPESP