Tesis
Estudio de proteínas recombinantes usando como modelo de expresión ovocitos de xenopus laevis
Autor
Navarrete Cáceres, Claudia
Resumen
Informe de Proyecto de Título para optar al Título de Ingeniero Civil en Biotecnología Acuícola Dentro de las proteínas esenciales para la vida se encuentra la glucosa, la cual para ingresar en la célula necesita ser facilitada por transportadores de glucosa llamados GLUTs los cuales se han descrito 14. Dentro de estas proteínas, el GLUT1 se encuentra altamente distribuido en los organismos, por lo que se ha convertido en el transportador de glucosa más estudiado. Sin embargo el desarrollo de investigación sobre otros transportadores de glucosa, especialmente en especies acuícolas, hasta el momento es muy escaso. La presente investigación se realizó para estudiar la proteína, transportadora de glucosa, GLUT 1 transfectada en células hepáticas HEK 293 y en ovocitos de Xenopus laevis. Para conseguir la transfección de la proteína se debió desarrollar un plásmido que fuera capaz de expresar la proteína dentro de las células, es así que se crea el plásmido T7dsRedGLUT1, caracterizado por tener el promotor T7, para su expresión en bacterias, resistencia al antibiótico Kanamicina, para su clonación en bacterias crecidas en medio de cultivo, gen de proteína fluorescente roja, para su mejor visualización en la célula, DNA de GLUT 1, para su expresión. Además se estudió la transfección en ovocitos de Xenopus laevis de la proteína GLUT 1 desde el plásmido AGA-GLUT1, este se caracteriza por tener el promotor T7, para su expresión en bacterias, resistencia al antibiótico ampicilina, para su clonación en bacterias crecidas en medio de cultivo, cadena poli adenina, da mayor estabilidad al RNA, DNA de GLUT 1. Los resultados obtenidos en la transfección en células HEK 293 dieron positivos para el DNA del plásmido T7dsRedGLUT1 donde se aprecia el transportador de glucosa situado en la membrana de las células, y el control GFP que se aprecia en toda la célula. LA transfección en ovocitos de Xenopus laevis, para el caso del mRNA de GLUT 1 del plásmido T7dsRedGLUT1, no se obtuvo expresión significativa en las células, mientras que el mRNA de GLUT 1 del plásmido AGA-GLUT1 se logró cuantificar transporte de glucosa en las células. Concluyendo así que el desarrollo de las técnicas utilizadas para la expresión del GLUT 1 permiten estudios futuros de otras proteínas de interés, incluyendo proteínas de especies acuícolas cultivables.