Introducción: Existen diversos materiales de retroobturación, pero poco se sabe de su toxicidad sobre fibroblastos gingivales. Objetivo: Evaluar la citotoxicidad de tres materiales de retroobturación sobre fibroblastos gingivales humanos y fibroblastos de la línea L929. Material y métodos: Los medios condicionados de los materiales de retroobturación  EndoSequence® BC RRMTM (ERRM), trióxido mineral agregado MTA Angelus® blanco (MTA) y material de restauración intermedia (IRM®) se obtuvieron en fresco, al tiempo de fraguado, y después de 1, 24 y 72 horas del tiempo de fraguado. La morfología celular fue evaluada por microscopia de luz y la viabilidad celular fue evaluada a través de la actividad metabólica mitocondrial con 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil bromuro de tetrazolio (MTT). El análisis estadístico se realizó por ANOVA. Resultados: El material ERRM no mostró efectos citotóxicos sobre los fibroblastos. Sin embargo, el MTA y el IRM® mostraron citotoxicidad moderada y alta, respectivamente. Esto revela que el MTA y el IRM® no son completamente inocuos. Conclusión: Los materiales biocerámicos como el ERRM pueden ser considerados los materiales de retroobturación más biocompatibles.