Estudio inmunocitoquímico y molecular de cultivo primario de tejido molar

Abstract

Introduction. Gestational trophoblastic disease comprises a set of pathologies characterized by abnormal growth and invasion of the trophoblast. The molecular basis of this pathology is unknown, partly due to the difficulty of having adequate biological models. It is suggested that the insulin-like growth factor system may play a fundamental role in the development of the disease. Objective. To characterize primary cultures of first-trimester placentas from patients with complete hydatidiform mole and non-molar miscarriage by morphology, immunocytochemistry, and differential expression of some genes of the insulin-like growth factor system. Materials and methods. Immunocytochemistry was used to determine trophoblastic cells and detection by reverse transcription and polymerase chain reaction of genes of the insulin-like growth factor system associated with cell type. Results. The morphology showed heterogeneity of the cultures, including mesenchymal, trophoblastic and deciduous cells. The content of trophoblast cells with cytokeratin-7 (specific marker) was between 16 and 37%. Gene expression corroborated the presence of trophoblast by means of insulin-like growth factor II mRNA, while variant growth hormone transcripts evidenced the presence of syncytiotrophoblast. Insulin-like growth factor I and binding protein type 1 were associated with mesenchymal and deciduous cells. Higher expression of insulin-like growth factor II was observed in molar tissues compared to non-molar abortion. Conclusions. The results showed the usefulness of combining three methodologies, morphology, immunocytochemistry and gene expression, as tools for the characterization and monitoring of placental cultures from complex abnormal tissue samples, thus facilitating diagnosis.

Introducción. La enfermedad trofoblástica gestacional comprende un conjunto de patologías caracterizadas por crecimiento e invasión anómalos del trofoblasto. Las bases moleculares de esta patología son desconocidas, en parte por la dificultad para disponer de modelos biológicos adecuados. Se plantea que el sistema de factores de crecimiento similares a la insulina puede tener un papel fundamental en el desarrollo de la enfermedad. Objetivo. Caracterizar cultivos primarios de placentas de primer trimestre provenientes de pacientes con mola hidatidiforme completa y aborto espontáneo no molar mediante morfología, inmunocitoquímica y expresión diferencial de algunos genes del sistema de factores de crecimiento similares a la insulina. Materiales y métodos. Se empleó inmunocitoquímica para determinar células trofoblásticas y detección por transcripción reversa y reacción en cadena de la polimerasa de genes del sistema de factores de crecimiento similares a la insulina asociados al tipo celular. Resultados. La morfología evidenció heterogeneidad de los cultivos, incluidas células mesenquimales, trofoblásticas y de decidua. El contenido de células de trofoblasto con citoqueratina-7 (marcador específico) estuvo entre 16 y 37%. La expresión de genes corroboró la presencia de trofoblasto por medio del ARNm del factor II de crecimiento similar a la insulina, en tanto que los transcritos de la hormona de crecimiento variante evidenciaron la presencia de sincitiotrofoblasto. El factor I de crecimiento similar a la insulina y la proteína de unión tipo 1 se relacionaron con células mesenquimales y de decidua. Se observó una mayor expresión del factor II de crecimiento similar a la insulina en tejidos molares en comparación con aborto no molar. Conclusiones. Los resultados mostraron la utilidad de combinar tres metodologías, morfología, inmunocitoquímica y expresión de genes, como herramientas para la caracterización y seguimiento de cultivos placentarios a partir de muestras de tejidos anómalos complejos, facilitando así el diagnóstico.