| dc.creator | Souza, Luan Felipo Botelho | |
| dc.creator | Vieira, Deusilene Souza | |
| dc.creator | Salcedo, Juan Miguel Villalobos | |
| dc.date | 2018-05-21T14:02:58Z | |
| dc.date | 2018-05-21T14:02:58Z | |
| dc.date | 2014 | |
| dc.date.accessioned | 2023-10-12T13:43:14Z | |
| dc.date.available | 2023-10-12T13:43:14Z | |
| dc.identifier | SOUZA, Luan Felipo Botelho. Análise molecular do vírus da hepatite Delta: desenvolvimento de transcrição reversa-PCR em tempo real e nested PCR-RFLP para quantificação e genotipagem viral. 2014. 80 f. Dissertação (Mestrado) - Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental, Fundação Universidade Federal de Rondônia, Porto Velho, 2014. | |
| dc.identifier | http://www.ri.unir.br/jspui/handle/123456789/2209 | |
| dc.identifier.uri | https://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/9198088 | |
| dc.description | Dissertação apresentada ao Programa de Pósgraduação
em Biologia Experimental – PGBIOEXP – do
Núcleo de Saúde da Universidade Federal de Rondônia
para obtenção do título de mestre. | |
| dc.description | O vírus da hepatite Delta (HDV) é um patógeno que causa um infecção grave e
rapidamente progressiva nos pacientes portadores. A determinação da quantidade e do genótipo do
vírus circulante no sangue de pacientes com a infecção pelo HDV é importante para o diagnóstico,
monitoramento do tratamento e para oferecer suporte para estudos de acompanhamento da
replicação viral no curso da doença. Neste estudo desenvolvemos in house um ensaio capaz de
detectar e quantificar o vírus da hepatite Delta através de amostras de soro baseando-se em uma
Transcrição reversa–PCR em tempo real quantitativa (HDV RT-qPCR) e uma nested PCR-RFLP
para a genotipagem do HDV. Para a determinação da carga viral foram produzidos dois calibradores
padrão, um cDNA HDV clonado em plasmídeo e um transcrito de RNA HDV. Para a validação este
ensaio foram utilizadas 140 amostras clínicas de soro, sendo 100 amostras clínicas de pacientes
anti-HDV e antígeno de superfície do vírus da hepatite B (HBsAg) reagentes por ELISA, 30
amostras clínicas de doadores de sangue, 5 amostras clínicas monoinfectadas pelo vírus da
hepatite B (HBV) e 5 amostras monoinfectadas pelo vírus da hepatite C (HCV). Para genotipagem
foi estabelecida uma nested PCR-RFLP, utilizando Xho l e a Sma l para digerir os amplicons, os
resultados corroboraram com as análises por sequenciamento. O desempenho do ensaio HDV RTqPCR
foi melhor quando utilizado o calibrador padrão HDV baseado em cDNA clonado em
plasmídeo linear com uma eficiência de 99,8% e linearidade de R2 0,97 e uma especificidade de
100% nos ensaios in vitro. Este estudo representa o primeiro ensaio HDV RT-qPCR desenvolvido
com amostras clínicas do Brasil e oferece um grande potencial para novos estudos de eficácia
clínica da terapêutica antiviral para utilização em pacientes com hepatite Delta na região ocidental
da Amazônia. | |
| dc.format | application/pdf | |
| dc.subject | Vírus da hepatite Delta | |
| dc.subject | PCR em tempo real | |
| dc.subject | Genotipagem | |
| dc.title | Análise molecular do vírus da hepatite Delta: desenvolvimento de transcrição reversaPCR em tempo real e nested PCR-RFLP para quantificação e genotipagem viral | |
