| dc.contributor | Franco, Octávio Luiz | |
| dc.contributor | http://lattes.cnpq.br/8598274096498065 | |
| dc.contributor | Reis, Angela Mehta dos | |
| dc.contributor | http://lattes.cnpq.br/0055119344402132 | |
| dc.contributor | Santos, Marcelo de Oliveira | |
| dc.contributor | http://lattes.cnpq.br | |
| dc.contributor | Goliatt, Priscila Vanessa Zabala Capriles | |
| dc.contributor | http://lattes.cnpq.br/3074561832181610 | |
| dc.contributor | Ramada, Marcelo Henrique Soller | |
| dc.contributor | http://lattes.cnpq.br/9066392392678813 | |
| dc.contributor | Pereira, Jorge Fernando | |
| dc.contributor | http://buscatextual.cnpq.br | |
| dc.creator | Santos, Cristiane dos | |
| dc.date | 2019-07-08T18:42:03Z | |
| dc.date | 2019-06-28 | |
| dc.date | 2019-07-08T18:42:03Z | |
| dc.date | 2019-05-17 | |
| dc.date.accessioned | 2023-09-29T16:41:33Z | |
| dc.date.available | 2023-09-29T16:41:33Z | |
| dc.identifier | https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/10231 | |
| dc.identifier.uri | https://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/9137880 | |
| dc.description | Gene function determination, among at the confirmation of genes involvement in
certain biological condition, is still a post-genomic era challenge, being that the
proteomic analysis is a powerful technique for this purpose. Cellular organelles
enrichment can also contribute for the less abundant proteins identification in the
complex plant samples analysis. In the present study, young leaves of Brassica
oleracea var. capitata (cabbage) of moderately resistant (Astrus Plus) and
susceptible (Veloce) cultivars ware infiltrated with Xanthomonas campestris pv.
campestris, (NaCl 0.85% and Xcc OD600 = 0.6 solution) and collected 24 h after
infection. For the control condition, the both cultivars leaves were infiltrated with NaCl
0.85% solution. Proteins from leaf extract samples and chloroplasts were extracted
with phenol and precipitated with ammonium acetate in methanol. The samples were
analyzed by LC-MS/MS and the generated spectra were submitted to software’s
Progenesis QI and PEAKS7® for protein identification and quantification. After the
comparison of the resistant inoculated cultivar with the control (RI:RC) resulted in
2680 identified proteins, while 2686 proteins were found in the susceptible inoculated
cultivar compared to the control (SI:SC). More than 300 differentially abundant
proteins, in both cultivars, were identified. The chloroplast enrichment contributed
with more than 600 proteins in RI:RC and more than 900 in SI:SC, not identified in
leaf extract samples. We further analyzed 30 genes by RTq-PCR in both cultivars. In
resistant cultivar, 9 genes had differential expression level statistically significant
when compared with control (7 up-regulated and 2 down-regulates), while the
susceptible cultivar showed 11 validated genes (10 up-regulated and 3 downregulated).
Among the differentially expressed genes, with statistical significance,
evaluated by RTq-PCR, three genes, potentially involved in plant defense were
choose for functional validation by genic overexpression in model plant. The genes,
BoCHB4, BoESP e BoRGP1, expressed in Arabidopsis, were validated and showed
up-expression in transgenic plants in RTq-PCR analysis (578, 22,000 and 7.5-fold,
respectively), when compared with non-transformed plants (wild type, WT). This work
besides of to contribute for protein database enrichment and identified proteins of
stress adaptation by the plant provide information of potential genes candidates in
genetic enhancement programs. | |
| dc.description | A determinação da função gênica, visando a confirmação do envolvimento de genes
em determinada condição biológica, ainda é um desafio da era pós-genômica, sendo
que a análise proteômica se mostra uma técnica poderosa para essa finalidade. O
enriquecimento de organelas também pode contribuir para a identificação de
proteínas menos abundantes na análise de amostras complexas de plantas. No
presente estudo, folhas jovens de Brassica oleracea var. capitata (repolho) de
cultivares moderadamente resistente (Astrus Plus) e suscetível (Veloce) foram
infiltradas com suspensão de Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc),
(solução NaCl 0,85% e Xcc, OD600=0,6) e coletadas 24 h após a infecção. Para a
condição controle, folhas de ambas as cultivares foram infiltradas com solução de
NaCl 0,85%. As proteínas foram extraídas, do extrato de folhas e cloroplastos, com
fenol e precipitadas em acetato de amônio em metanol. As amostras foram
analisadas por LC-MS/MS e os espectros gerados foram analisados com os
softwares Progenesis QI e PEAKS7® para identificação e quantificação de proteínas.
Após a comparação da cultivar resistente inoculada com a não inoculada (RI:RC)
foram identificadas 2680 proteínas, enquanto 2686 proteínas foram encontradas na
comparação entre a cultivar suscetível inoculada comparada ao controle (SI:SC).
Mais de 300 proteínas diferencialmente abundantes, em ambas as cultivares, foram
identificadas. Do total geral, o enriquecimento de cloroplasto contribuiu com mais
600 proteínas em RI:RC e mais de 900 em SI:SC, que não foram detectadas nas
amostras do extrato de folha. Foram analisados ainda 30 genes por RTq-PCR em
ambas as cultivares. Na cultivar resistente, 9 genes tiveram nível de expressão
diferencial estatisticamente significante em relação ao controle (7 com expressão
aumentada e 2 diminuída) na cultivar resistente, enquanto a cultivar suscetível
mostrou 13 genes validados (10 regulados positivamente e 3 negativamente). Entre
os genes diferencialmente expressos, com significância estatística, avaliados por
RTq-PCR, três genes, potencialmente envolvidos na defesa da planta, foram
escolhidos para validação funcional por superexpressão gênica em planta modelo.
Os genes de repolho, BoCHB4, BoESP e BoRGP1, expressos em Arabidopsis,
foram validados demonstrando expressão aumentada nas plantas transgênicas
(578, 22.000 e 7,5 vezes, respectivamente) quando comparado com as plantas não
transformadas (wild type-WT). Este trabalho, além de contribuir para o
enriquecimento do banco de dados e identificação de proteínas de adaptação ao
estresse pela planta, pode fornecer informações de genes candidatos para
programas de melhoramento genético. | |
| dc.description | CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior | |
| dc.format | application/pdf | |
| dc.language | por | |
| dc.publisher | Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF) | |
| dc.publisher | Brasil | |
| dc.publisher | ICB – Instituto de Ciências Biológicas | |
| dc.publisher | Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas: Imunologia e Doenças Infecto-Parasitárias/Genética e Biotecnologia | |
| dc.publisher | UFJF | |
| dc.rights | Acesso Aberto | |
| dc.rights | Attribution-NoDerivs 3.0 Brazil | |
| dc.rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nd/3.0/br/ | |
| dc.subject | Interação planta-patógeno | |
| dc.subject | Podridão negra | |
| dc.subject | Proteômica | |
| dc.subject | Superexpressão gênica | |
| dc.subject | Repolho | |
| dc.subject | Plant-pathogen interaction | |
| dc.subject | Cabbage | |
| dc.subject | Proteome | |
| dc.subject | Genic overexpression | |
| dc.subject | Cabbage | |
| dc.subject | CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA | |
| dc.title | Identificação de proteínas e validação de genes envolvidos na resistência de Brassica oleracea a Xanthomonas campestris pv. campestris | |
| dc.type | Tese | |
