| dc.contributor | Universidade Estadual Paulista (UNESP) | |
| dc.creator | Silva, Ketherson Rodrigues | |
| dc.date | 2014-06-11T19:27:57Z | |
| dc.date | 2016-10-25T19:15:52Z | |
| dc.date | 2014-06-11T19:27:57Z | |
| dc.date | 2016-10-25T19:15:52Z | |
| dc.date | 2011-02-28 | |
| dc.date.accessioned | 2017-04-06T04:05:11Z | |
| dc.date.available | 2017-04-06T04:05:11Z | |
| dc.identifier | SILVA, Ketherson Rodrigues. Clonagem e expressão do gene da nucleoproteína (np) do vírus da doença de newcastle em Escherichia coli para aplicação no imunodiagnóstico. 2011. xix, 80 f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, 2011. | |
| dc.identifier | http://hdl.handle.net/11449/95935 | |
| dc.identifier | http://acervodigital.unesp.br/handle/11449/95935 | |
| dc.identifier | silva_kr_me_jabo.pdf | |
| dc.identifier | 000674518 | |
| dc.identifier | 33004102072P9 | |
| dc.identifier.uri | http://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/907264 | |
| dc.description | A nucleoproteina do vírus da doença de Newcastle (VDN) é um dos componentes antigênicos ideais para fazer o imunodiagnóstico da DN, por ser mais conservada e possuir uma elevada imunogenicidade. A sequência completa do gene da nucleoproteína (NP) (1470 pb) da estirpe La Sota do VDN foi amplificada, nesse estudo, por RT-PCR e submetida a clonagem no vetor de expressão em Escherichia coli pETSUMO (Invitrogen). A proteína NP foi expressa sob a forma de uma proteína recombinante de fusão contendo o peptídeo SUMO e a sequência de poli-histidina, em seguida foi purificada em resina de níquel-agarose e caracterizada por SDSPAGE e Western-blotting, apresentando um peso molecular de cerca de 66kDa e reatividade com anticorpos policlonais de galinhas hiperimunizadas com esse mesmo vírus. Foi então desenvolvido um método indireto de ELISA com essa proteína (NPVDN- ELISA) para ser aplicado na detecção de anticorpos anti-virais específicos. O NP-VDN-ELISA revelou ser capaz de diferenciar amostras de soros positivos para o VDN das amostras de soros negativos e, na comparação dos resultados obtidos na análise de 125 soros de campo pelo NP-VDN-ELISA com os do teste de Inibição da Hemaglutinação (HI), foi encontrado um coeficiente de correlação significante entre estes métodos (r = 0,8345), bem como elevadas sensibilidade (89,3%), acurácia (90,4%) e especificidade (95,5%). Concluindo, a proteína NP recombinante expressa pelo sistema pET SUMO – E. coli compartilha os principais epítopos para interagir com anticorpos de galinhas produzidos contra a proteína NP do VDN, tendo, portanto, um bom potencial de ser aplicada de forma bem sucedida e com vantagens no teste de ELISA para realizar de forma mais rápida e prática, o imunodiagnóstico da DN de um maior número de amostras séricas de galinhas | |
| dc.description | The nucleocapsid protein (NP) of Newcastle Disease Virus (NDV), is a preferred choice to develop a serologic assay on account of highly conserved sequences, and high immunogenicity. The whole open-reading-frame (orf) of NP gene from LaSota strain of NDV was amplified by RT-PCR and cloned in pETSUMO vector (Invitrogen) and Escherichia coli as cellular host. The NP protein was expressed as a fusion recombinant protein containing SUMO peptide and poly-histidine tags. This protein was easily purified in nickel-agarose resin, and characterized by SDS-PAGE and Western-blotting, showing a molecular weight of approximately 66 kDa and reactivity with polyclonal antibodies from NDV hiperimmunized chickens. The recombinant NP protein was used as antigen to develop an indirect ELISA (NP-NDVELISA) for the detection chicken anti-NDV antibodies. The capability of the recombinant NP protein to differentiate positive from normal chicken sera was evident in NP-NDV-ELISA, and by comparing this ELISA with haemagglutination-inhibition test (HI) a high and significant correlation with the haemagglutination-inhibition test (r = 0,8345), as well as high sensitivity (89,3%), specificity (95,5%) and accuracy (90,4%) were obtained. In conclusion the results indicated that the recombinant NP protein shared the main epitopes with the homologous viral protein and has a great potential to be advantageously used in the ELISA for the analysis of large number of samples in the DN immunodiagnosis | |
| dc.description | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) | |
| dc.language | por | |
| dc.publisher | Universidade Estadual Paulista (UNESP) | |
| dc.rights | info:eu-repo/semantics/openAccess | |
| dc.subject | Nucleoproteinas | |
| dc.subject | Newcastle, Doença de | |
| dc.subject | Teste imunoenzimático | |
| dc.subject | Clonagem e expressão | |
| dc.subject | Cloning and expression | |
| dc.subject | Recombinant nucleoprotein | |
| dc.subject | Newcastle disease virus | |
| dc.subject | ELISA | |
| dc.subject | Antibodies | |
| dc.title | Clonagem e expressão do gene da nucleoproteína (np) do vírus da doença de newcastle em Escherichia coli para aplicação no imunodiagnóstico | |
| dc.type | Otro | |
