Caracterização de microRNAS em vesículas extracelulares no câncer de mama

dc.contributorRibeiro, Enilze Maria de Souza Fonseca, 1958-
dc.contributorFerreira, Danielle Malheiros
dc.contributorCavalli, Iglenir João
dc.contributorCavalli, Luciane Regina
dc.contributorUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Genética
dc.creatorOzawa, Patricia Midori Murobushi, 1990-
dc.date2022-06-13T19:45:52Z
dc.date2022-06-13T19:45:52Z
dc.date2018
dc.date.accessioned2023-09-28T17:44:47Z
dc.date.available2023-09-28T17:44:47Z
dc.identifierhttps://hdl.handle.net/1884/73867
dc.identifier.urihttps://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/9026783
dc.descriptionOrientadora: Profa. Dra. Enilze M. S. F. Ribeiro
dc.descriptionCoorientadores: Prof a. Dra. Danielle Malheiros Ferreira, Prof. Dr. Iglenir João Cavalli, Dra. Luciane Regina Cavalli
dc.descriptionTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa : Curitiba, 25/10/2018
dc.descriptionInclui referências
dc.descriptionResumo: O câncer de mama (CM) é a maior causa de morte por câncer em mulheres no mundo. A detecção precoce ainda é o fator determinante para um melhor curso da doença e aumento da sobrevida das pacientes e miRNAs derivados de vesículas extracelulares (VE-miRNAs) têm sido sugeridos como potenciais biomarcadores moleculares para o CM. Os VE-miRNAs estão associados a processos tumorigênicos no CM, como invasão, metástase e angiogênese, e a investigação de suas funções no contexto da doença é importante para uma melhor compreensão da patogênese. Apesar de uma série de marcadores moleculares terem sido descritos com potencial diagnóstico e prognóstico no CM, a utilização de VE-miRNAs como biomarcadores não é comprovada. Neste estudo, o objetivo foi avaliar o potencial diagnóstico e prognóstico de VE-MiRNAs isoladas de amostras de biópsias líquidas de pacientes com CM e controles, além de investigar a sua ação na modulação do potencial tumorigênico em linhagens celulares de mama. A expressão diferencial de VE-miRNAs foram identificadas por análise de RNAseq em amostras de soro de pacientes em comparação com controles. As VEs foram isoladas utilizando um kit de precipitação e o seu RNA extraído com kit comercial. A caracterização das VEs foram feitas por análise de rastreamento de partículas, microscopia eletrônica de transmissão e western blotting. O painel composto por alta expressão de miR-142-5p, miR- 320a e miR-4433b-5p, foi capaz de diagnosticar o CM com uma acurácia de 0,84 (sensibilidade de 93,33%, especificidade de 68,75%), e a combinação da alta expressão dos miR-142-5p e miR-320a gerou uma área sob a curva (AUC) de 0,94, com 100% de sensibilidade e 93,80% de especificidade para distinguir o subgrupo Luminal A. Foi verificado também que a baixa expressão dos miR-142-5p e miR-150-5p foi associada com grau de tumor 3 (p<0,05) e a alta expressão de miR-142-5p e miR-320a com tamanho de tumor <20mm (p<0,01). O estudo funcional investigando os efeitos de VEs derivadas da linhagem celular triplo negativa HCC1806 (HCC1806-VEs) em células não tumorigênicas (MCF10A) demonstrou que essas VEs foram capazes de induzir aumento de proliferação celular e resistência às drogas quimioterápicas, docetaxel e doxorrubicina, utilizadas rotineiramente no tratamento clinico de pacientes com CM. A análise de expressão gênica e de miRNAs nas células não tumorigênicas receptoras, demonstrou que esses efeitos tumorigenicos podem ter sido causados por alterações em genes e miRNAs envolvidos em vias de sinalização celulares relacionadas à patogênese do câncer, como por exemplo a 9 PI3K-AKT e apoptose. Interessantemente, o enriquecimento do miR-150-5p, através do ensaio de transfecção utilizando mimetizador de mRNA, em HCC1806-VEs não foi capaz de modificar esses efeitos. Estes resultados demonstram que VEs e seu conteúdo de miRNAs são relevantes para a patogênese do CM, com os miRNAs possuindo potencial como biomarcadores moleculares para diagnóstico e prognóstico dessa doença.
dc.descriptionAbstract: Breast cancer (BC) is the leading cause of death by cancer in women worldwide. Early detection is still the determinant factor to improve patient?s outcome and overall survival and miRNAs derived from extracellular vesicles (EV-miRNAs) have been suggested as potential BC biomarkers. EV-miRNAs are associated with tumorigenic processes in BC, including invasion, metastasis and angiogenesis and the investigation of their role in BC is important to understand its pathogenesis. Although a serie of molecular markers have been described with diagnosis and prognosis potencial in BC, the use of EVmiRNAs as biomarkers are not set. In this study, the objective was to evaluate the diagnosis and prognosis potential of EV-miRNAs isolated from liquid biopsy samples from BC patients and controls, and also to investigate their action on tumorigenic potential modulation in breast cell lines. The differential expression of EV-miRNAs were identified by RNAseq analysis on BC patients in comparison with controls. The EVs were isolated using a precipitation kit, with their miRNA isolated using a commercial kit. The EVs were characterized by nanotracking analysis (NTA), transmission electron microscopy (TEM) and western blotting. A panel composed by overexpression of miR-142-5p, miR-320a and miR- 4433b-5p, was capable of diagnose BC with an accuracy of 0.84 (93.33% sensitivity, 68.75%), and the combination of miR-142-5p and miR-320a overexpression generated an area under the curve (AUC) of 0.94, with 100% sensitivity and 93.80% specificity, to distinguish the Luminal A subgroup. It was also verified that down-expression of miR-142- 5p and miR-150-5p were associated with tumor grade 3 (p<0.05 for both) and overexpression of miR-142-5p and miR-320a with tumor size (<20mm) (p<0.01 for both). The functional analysis investigating the effects of EVs derived from the triple negative cell line HCC1806 (HCC1806-EVs) on non-tumorigenic cells (MCF10a) showed that these EVs were capable of inducing increase in cell proliferation and drug resistance to the chemotherapy drugs, docetaxel and doxorubicin, commonly used in BC treatment. The gene expression and miRNA analysis in non-tumorigenic recipient cells, showed these effects were probably caused by alteration in the expression of genes and miRNAs involved in signaling pathways associated to cancer pathogenesis, such as PI3K-AKT and apoptosis. Interestingly, the enrichment of miR-150-5p, by mRNA mimic transfection assay, in HCC1806-EVs was not capable of modifying these effects. Altogether, these results demonstrate that EVs and their miRNA content are relevant for BC pathogenesis, with 11 miRNAs possessing potential as diagnosis and prognosis molecular biomarkers of this disease.
dc.format1 recurso online : PDF.
dc.formatapplication/pdf
dc.formatapplication/pdf
dc.languagePortuguês
dc.languageTexto em português e inglês
dc.languageporeng
dc.subjectExossomos
dc.subjectMicroRNAs
dc.subjectMamas - Câncer
dc.subjectBiomarcadores
dc.subjectGenética
dc.titleCaracterização de microRNAS em vesículas extracelulares no câncer de mama
dc.typeTese Digital


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