Reação em cadeia da polimerase multiplex (mPCR) para detecção de fraude e identificação de salmonella spp. em amostras de carne bovina e bubalina

Multiplex polymerase chain reaction (mPCR) for fraud detection and identification of salmonella spp. in beef and buffalo meat samples

dc.contributorLOURENÇO, Lúcia de Fátima Henriques
dc.contributorhttp://lattes.cnpq.br/7365554949786769
dc.creatorDANTAS, Vanderson Vasconcelos
dc.date2022-06-10T16:47:49Z
dc.date2022-06-10T16:47:49Z
dc.date2019-09-20
dc.date.accessioned2023-09-28T15:25:23Z
dc.date.available2023-09-28T15:25:23Z
dc.identifierDANTAS, Vanderson Vasconcelos. Reação em cadeia da polimerase multiplex (mPCR) para detecção de fraude e identificação de salmonella spp. em amostras de carne bovina e bubalina. Orientadora: Lúcia de Fátima Henriques Lourenço; Coorientadora: Carina Martins de Moraes. 2019. 82 f. Tese (Doutorado em Ciência e Tecnologia de Alimentos) - Instituto de Tecnologia, Universidade Federal do Pará, Belém, 2019. Disponível em: http://repositorio.ufpa.br:8080/jspui/handle/2011/14461. Acesso em:.
dc.identifierhttp://repositorio.ufpa.br:8080/jspui/handle/2011/14461
dc.identifier.urihttps://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/9014341
dc.descriptionThe authenticity of food has become a major issue today, for economic reasons, lifestyle, health and religious beliefs, as well as a requirement of food regulators. Proper labeling of a meat product according to its identity and quality standard is essential to ensure the food safety of consumers. However, the identification of meat and meat constituents is still a challenge for the authorities, as it is not always possible to authenticate the species of origin using commonly used methods, especially in cases where adulteration by the addition of material occurs. from a species other than those indicated on the label. The aim of this study was to optimize and develop different Multiplex Polymerase Chain Reaction (mPCR) protocols for simultaneous identification of bovine and buffalo species and for identification of Salmonella spp. in commercially available meat cuts. Two methods of DNA extraction were applied (commercial kit and from the use of organic solvents) and the quality / quantity of the obtained material was determined by agarose gel electrophoresis and spectrophotometry. Primers that amplify sequences of 429 base pairs for Salmonella spp. DNA, 346 base pairs for bovine DNA and 220 base pairs for buffalo DNA were used to perform the proposed mPCR. dilution of the extracted template DNA. For the verification of specificity, DNAs from different animal species and microorganisms were used. After standardization of the technique, bovine and buffalo meat samples were artificially contaminated with standard Salmonella tiphymurium strain (ATCC 14028), so that the detection limit of the technique was determined and, finally, commercial samples of meat cuts commercialized in northern Brazil. Brazil were analyzed by this technique to verify the hypothesis of fraud and the presence of Salmonella spp. in products marketed in the target region of the study. The results showed that the proposed mPCR presented adequate sensitivity and specificity, being able to detect Salmonella spp. from 106 cfu/mL after 12h enrichment. In addition, it was observed that approximately 20% of the samples marketed as bovine origin were of bubaline origin, and of this total, 31% had Salmonella spp. It was concluded that The developed mPCRs are efficient to detect fraud in meat cuts and Salmonella spp. It may be an alternative to be used in the routine inspection of these products.
dc.descriptionA autenticidade dos alimentos tem se tornado uma questão importante na atualidade, por razões econômicas, estilo de vida, saúde e convicções religiosas, além de ser uma exigência dos órgãos fiscalizadores de alimentos. A rotulagem adequada de um produto conforme seu padrão de identidade e qualidade é imprescindível para garantir a segurança alimentar dos consumidores. No entanto, a identificação das carnes e constituintes de um produto cárneo ainda é um desafio para as autoridades, visto que nem sempre é possível a autenticação da espécie de origem a partir dos métodos comumente utilizados, principalmente em casos onde ocorrem adulterações pelo acréscimo de matéria prima oriunda de espécies diferentes daquelas indicadas no rótulo. O objetivo desse estudo foi otimizar e desenvolver diferentes protocolos de Reação em Cadeia da Polimerase Multiplex (mPCR) para identificação simultaneamente das espécies bovina e bubalina e para identificação de Salmonella spp. em cortes cárneos comercialmente disponíveis. Para tal foram aplicados dois métodos de extração de DNA e a qualidade e quantidade do material obtido foi determinada por eletroforese em gel de agarose e a partir de espectrofotometria. Para a execução da mPCR proposta foram utilizados iniciadores que amplificam sequências de 429 pares de base para DNA de Salmonella spp., 346 pares de bases para DNA bovino e 220 pares de bases para DNA bubalino e a avaliação da sensibilidade da técnica foi realizada a partir da diluição do DNA molde extraído. Já para a verificação da especificidade foram utilizados DNAs de diferentes espécies animais e de micro-organismos. Após a padronização da técnica, amostras de carne bovina e bubalina foram contaminadas artificialmente com cepa padrão de Salmonella tiphymurium (ATCC 14028), para que o limite de detecção da técnica fosse determinado e, por fim, amostras comerciais de cortes cárneos comercializados no norte do Brasil foram analisadas pela referida técnica, para verificar a hipótese da ocorrência fraude e da presença de Salmonella spp. em produtos comercializados na região alvo do estudo. Os resultados obtidos demonstraram que a mPCR proposta apresentou sensibilidade e especificidade adequadas, sendo capaz de detectar Salmonella spp. a partir de 106 ufc/mL após 12h de enriquecimento. Além disso, observou-se que aproximadamente 20% das amostras comercializadas como sendo de origem bovina eram de origem bubalina e que, desse total, 31% apresentavam presença de Salmonella spp. Concluiu-se que As mPCRs desenvolvidas são eficientes para detectar fraude em cortes cárneos e Salmonella spp. podendo ser uma alternativa a ser utilizada na rotina de fiscalização destes produtos.
dc.descriptionUEPA - Universidade do Estado do Pará
dc.formatapplication/pdf
dc.languagepor
dc.publisherUniversidade Federal do Pará
dc.publisherBrasil
dc.publisherInstituto de Tecnologia
dc.publisherUFPA
dc.publisherPrograma de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia de Alimentos
dc.rightsAcesso Aberto
dc.rightsAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil
dc.rightshttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/
dc.source1 CD-ROM
dc.sourceDisponível no correio eletrônico: bibliotecaitec@ufpa.br
dc.subjectAnálise de DNA
dc.subjectFraude economicamente motivada
dc.subjectDNA analysis
dc.subjectEconomicamically motivated fraud
dc.subjectCNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::CIENCIA E TECNOLOGIA DE ALIMENTOS
dc.subjectPROPRIEDADES QUÍMICAS, BIOQUÍMICAS E MICROBIOLÓGICAS DOS ALIMENTOS E COMPOSTOS BIOATIVOS
dc.subjectCIÊNCIA E TECNOLOGIA DE ALIMENTOS
dc.titleReação em cadeia da polimerase multiplex (mPCR) para detecção de fraude e identificação de salmonella spp. em amostras de carne bovina e bubalina
dc.titleMultiplex polymerase chain reaction (mPCR) for fraud detection and identification of salmonella spp. in beef and buffalo meat samples
dc.typeTese


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