O Enterococcus faecalis é considerado, atualmente, um dos grandes agentes responsáveis pelas infecções hospitalares, onde sua resistência a diversas drogas tem sido motivo de preocupação das autoridades. Neste contexto, o trabalho teve como objetivo determinar a suscetibilidade antimicrobiana e a presença de linhagens mutantes em E. faecalis. Foram obtidas 74 linhagens provenientes de hemoculturas e de secreções purulentas de pacientes internados no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, UNESP, no período de 1995 a 2001. Foram analisadas “in vitro”, quanto à sua suscetibilidade, a vancomicina e a ciprofloxacina através da determinação da concentração inibitória mínima (CIM), da concentração bactericida mínima (CBM) e a presença de linhagens mutantes através da determinação da taxa de mutação espontânea à ciprofloxacina. Os resultados demonstraram uma maior efetividade da vancomicina, que inibiu 98,6% das linhagens de E. faecalis (CIM 0,06 a 1mg/ml). Entretanto, quando da análise bactericida, o perfil de sensibilidade desta droga apresentou-se elevado, onde 73% das linhagens tiveram a CBM igual ou maior que 64mg/ml. Para a ciprofloxacina, o perfil de sensibilidade ficou distribuído entre as classes de CIM e CBM. Nesse estudo, não foi encontrada a presença de linhagens mutantes. Há probabilidade de algumas linhagens serem tolerantes à vancomicina, sendo necessário então, a realização de testes mais apurados, no sentido de confirmar esta característica.Enterococcus faecalis has been considered one of the major agents of nosocomial infection; its resistance to several drugs has been the concern of health authorities. The objective of this study was to determine antimicrobial susceptibility and the presence of mutant strains in E. faecalis. Seventy-four strains were obtained from hemocultures and purulent secretions of patients hospitalized at the Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu – UNESP between 1995 and 2001. They were analyzed in vitro for their susceptibility to vancomycin and ciprofloxacin by determining the minimum inhibitory concentration (MIC), minimum bactericidal concentration (MBC), and the presence of mutant strains through determination of the spontaneous mutation rate to ciprofloxacin. Our results showed vancomycin higher efficacy, inhibiting 98.6% of E. faecalis strains (MIC 0.06 1μg/ml). The bactericidal analysis, however, showed vancomycin high susceptibility profile, with 73% of strains, presenting MBC equal or higher than 64μ/ml. Ciprofloxacin sensitivity profile was found in MIC and MBC classes. No mutant strains were found in this study. It is probable that some strains are resistant to vancomycin, which requires that further tests be performed.