Produção de estreptavidina recombinante pela levedura Pichia pastoris

Production of recombinant streptavidin by Pichia pastoris yeast

dc.contributorhttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4744091Z4
dc.contributorPassos, Flávia Maria Lopes
dc.contributorhttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781817D3
dc.contributorPassos, Frederico José Vieira
dc.contributorhttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781218J9
dc.contributorGuimarães, Valéria Monteze
dc.contributorhttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4798758T3
dc.contributorNascimento, Antonio Galvão do
dc.contributorhttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4797432E8
dc.contributorMantovani, Hilário Cuquetto
dc.contributorhttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4727026Z7
dc.creatorFonseca, Marisa Cristina da
dc.date2015-03-26T13:52:02Z
dc.date2006-11-13
dc.date2015-03-26T13:52:02Z
dc.date2006-02-20
dc.date.accessioned2023-09-27T22:09:29Z
dc.date.available2023-09-27T22:09:29Z
dc.identifierFONSECA, Marisa Cristina da. Production of recombinant streptavidin by Pichia pastoris yeast. 2006. 69 f. Dissertação (Mestrado em Associações micorrízicas; Bactérias láticas e probióticos; Biologia molecular de fungos de interesse) - Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, 2006.
dc.identifierhttp://locus.ufv.br/handle/123456789/5386
dc.identifier.urihttps://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/8971475
dc.descriptionCom o intuito de utilizar estreptavidina como alvo para isolar proteínas de interesse numa coluna biotinilada, P. pastoris KM71 recombinante contendo o gene do core da estreptavidina, foi cultivada em regime de batelada alimentada na fase de produção de biomassa, alcançando uma concentração de 150 g L-1. Essa biomassa foi alcançada com um novo protocolo, que além de reduzir os passos, introduziu um aparato simples, mas eficiente de dispersão de ar. Um reator com capacidade para 1 L, com 200 mL de meio mínimo com glicerol, foi inoculado com uma pré-cultura para uma A600 inicial de 0,2. Após 24 horas de incubação, a 25 ºC, 500 rpm e injeção e dispersão de ar através de pedra porosa, a alimentação foi iniciada com meio de sais basais e glicerol até atingir um volume de 400 mL. A concentração de 2,0 moles L-1 de glicerol e fluxo de 0,11 mL min-1 utilizados na alimentação, permitiram obter máxima biomassa. Na fase de indução de estreptavidina, foi estudada a reutilização da biomassa na produção de estreptavidina em duas condições: livres em suspensão e imobilizadas em partículas de alginato de cálcio. Em ambos os casos a proteína produzida apresentou-se biologicamente funcional, exibindo ligação esperada à biotina. A concentração de estreptavidina no sobrenadante da cultura de células livres no período de máxima indução (96 horas) atingiu 4,0 g L-1, reduzindo para 3,2 e 0,87 g L-1 respectivamente em duas reutilizações. Quando comparada às concentrações de estreptavidina obtidas pelas células livres em cada utilização, a imobilização resultou na produção de 75% na primeira utilização, 50% na segunda, mas alcançando quase 80% na terceira utilização. A imobilização e a reutilização da biomassa de P. pastoris recombinante ainda não haviam sido reportadas e a produção de estreptavidina nessas condições demonstrou ser uma técnica em potencial.
dc.descriptionStreptavidin has been exploited as affinity tag to isolate protein in biotinilated columns. Recombinant Pichia pastoris KM71/Stp strains containing the streptavidin core gene were cultured in fed-batch generating 150 g L-1 biomass. This biomass was achieved with a simpler and shorter process that has never been reported. The yeast was pre-cultured into 50 mL minimum medium with glycerol as only carbon source at 25ºC and 250 rpm. After 12 hours incubation, the culture was transferred to a bioreactor with 200 mL of the same initial A600 0,2. After 24 hours incubation the culture was fed-batch with glycerol and basal salts medium to reach 400 mL. The glycerol concentration of 2.0 moles. L-1 combined with a flow of 0.11 mL. min-1 and aeration by air injection dispersed with a porous stone and magnetic stirring of 500 rpm were the set of conditions to yield maximum biomass. The streptavidin concentration at the supernatant of the free cell culture at 96 hours, the maximum induction period, has achieved 4.0 g. L-1, reducing to 3.2 and 0.87 g. L-1 with two reutilizations. At the same time period the immobilized culture yield 75 %, 50 % and 80% less at the first, second and third culture utilization, respectively. The immobilization and recycling of recombinant P. pastoris biomass can prove to be a potential strategy to improve volumetric productivity.
dc.descriptionCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
dc.formatapplication/pdf
dc.formatapplication/pdf
dc.languagepor
dc.publisherUniversidade Federal de Viçosa
dc.publisherBR
dc.publisherAssociações micorrízicas; Bactérias láticas e probióticos; Biologia molecular de fungos de interesse
dc.publisherMestrado em Microbiologia Agrícola
dc.publisherUFV
dc.rightsAcesso Aberto
dc.subjectEstreptavidina
dc.subjectPichia pastoris
dc.subjectBiomassa
dc.subjectPurificação
dc.subjectProteínas recombinantes
dc.subjectReatores químicos
dc.subjectBiotina
dc.subjectStreptavidin
dc.subjectPichia pastoris
dc.subjectBiomass
dc.subjectPurification
dc.subjectRecombinant proteins
dc.subjectChemical reactors
dc.subjectCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA::MICROBIOLOGIA APLICADA
dc.titleProdução de estreptavidina recombinante pela levedura Pichia pastoris
dc.titleProduction of recombinant streptavidin by Pichia pastoris yeast
dc.typeDissertação


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